产品信息

产品描述

MitoSOX Red是一种新型的，可渗透活细胞，用于线粒体内超氧化物检测的荧光探针，其可快速、特异性地靶向线粒体，从而有选择性地检测线粒体内的超氧化物。MitoSOX Red 进入线粒体后会被超氧化物氧化，而不会被其他活性氧（ROS）或活性氮（RNS）生成系统氧化。被氧化的MitoSOX Red 随后与线粒体/细胞核内的核酸结合，产生强红色荧光。本试剂盒可使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪、流式细胞仪等荧光检测系统进行检测，其激发波长为510 nm，发射波长为580 nm。

储存与运输

冰袋(Wet ice)运输；-20℃避光保存，12个月有效。

试剂盒组成

操作步骤

1 检测工作液配制：

1.1 用PBS（推荐G4202）将MitoSOX Red（5 mM）储存液稀释成5 μM的检测工作液：1 mL PBS溶液中加入1 μL的MitoSOX Red（5 mM）。

1.2 （可选）1×H₂O₂配制：1 mL完全培养基中加入2 μL H₂O₂（500×），配制成1×H₂O₂诱导溶液。

2 （可选）阳性对照组细胞准备：

2.1 取状态良好的细胞去除原有培养基，悬浮细胞离心去除培养基。

2.2 加入1×H₂O₂，37℃培养箱诱导1 h。（若刺激1 h，细胞状态变差，可适当降低H₂O₂浓度或者缩短诱导时间；若荧光较弱，则适当延长诱导时间或者增加H₂O₂浓度）。

3 细胞染色（以下为贴壁细胞方案，悬浮细胞换液需要离心操作）：

3.1 正常或处理过后的细胞，用PBS洗涤2-3次。

3.2 加入预热的检测工作液，37℃避光孵育20 min（不同细胞可以调整检测液的浓度和孵育时间）。

3.3 去除探针，PBS洗涤2-3次。

3.4 用不含酚红胰酶消化后，PBS重悬，选择PE通道检测流式。如果用荧光显微镜可直接观察，选择DsRed通道即可激发。若用酶标仪检测，推荐使用黑底不透明发光板（LTP-96-BY）检测，设置激发波长510 nm，发射波长580 nm。

注意事项

1. 首次使用，建议分装后使用，避免反复冻融。

2. 血清和酚红(Phenol red)对本荧光探针的检测有干扰，需避免。

3. MitoSOX Red在与超氧化物反应后可能会重新分布，并与线粒体或细胞核DNA结合，因此观察到红色荧光集中在细胞核属于正常现象。

4. MitoSOX Red的终浓度通常为1-5 μM，高浓度工作液会产生细胞毒性。

5. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

6. 配制好的工作液不稳定，建议现配现用。

7. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）