产品信息

产品描述

BODIPY 581/591 C11是一种BODIPY氟硼化物类似物，且是一种具有高度亲脂性的比率型荧光探针，可以快速入膜，随后选择性的对细胞内和细胞膜上的脂质过氧化进行捕获，染料由还原态转变为氧化态，该过程中同时伴随着荧光信号的变化，其荧光发射峰从590 nm还原态偏移至510 nm氧化态（荧光由红转绿）。BODIPY 581/591 C11还原态和氧化态发射波光谱能很好分开，对氧自由基、过氧亚硝酸盐比较敏感，对超氧化物、NO、铁离子、H₂O₂不敏感。BODIPY 581/591 C11常用于评价活细胞内脂质过氧化和抗氧化性能的研究，也可用于测定铁死亡。铁死亡的主要机制是，在二价铁或酯氧合酶的作用下，催化细胞膜上高表达的不饱和脂肪酸，发生脂质过氧化，从而诱导细胞死亡。

本试剂盒提供的BODIPY 581/591 C11（1000×）为2 mM储存液，适用于大多数细胞，为了得到更为满意的结果，可以适度调节染料浓度，BODIPY 581/591 C11的终浓度一般为2-10 μM，最优先的推荐终浓度为2 μM。本试剂盒提供额外H₂O₂（500×）作为阳性诱导剂，通常使用浓度为1×。不同细胞的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行摸索最佳工作浓度作用时间。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃避光保存，6个月有效。

试剂盒组成

操作步骤

1. BODIPY 581/591 C11染料工作液配制：

用PBS将BODIPY 581/591 C11（1000×）稀释到1×，如1 μL BODIPY 581/591 C11（1000×）加入到1 mL PBS中混合均匀，得2 μM BODIPY 581/591 C11，现配现用。

2. 阳性对照设置（可选）

(1) 将贴壁细胞以2-5×10⁵个/孔细胞提前过夜铺在6孔板中，用PBS（G4202）洗涤细胞2-3次。

(2) 加入1 mL BODIPY 581/591 C11染料工作液，37℃孵育20-30 min，用PBS洗涤细胞2-3次。

(3) 将过氧化氢稀释为1×：取2 μL H₂O₂（500×）加入到1 mL无血清、无酚红的培养基或PBS中，混合均匀。

(4) 加入1 mL稀释好的过氧化氢，37℃孵育1-4 h（不同细胞处理浓度和时间不同，可调整），用PBS洗涤1-2次。

(5) 如果用荧光显微镜或共聚焦显微镜，用PBS覆盖后，分别使用GFP和DsRed通道观察。若需要用流式细胞仪器分析，则需无酚红胰酶将细胞消化后用PBS重悬后用FITC和PE通道测试。

(6) 结果分析：通常过氧化氢处理后脂质过氧化产物含量大量增加，BODIPY 581/591 C11染色后观察绿色荧光增强，红色荧光减弱；而正常的细胞经BODIPY 581/591 C11染色后应显示较强的红色荧光，绿色荧光较弱。

2. 悬浮细胞

(1) 用PBS将加药处理好的悬浮细胞洗涤2次，并用PBS重悬得到每管细胞数为2×10⁶个的细胞悬液。

(2) 再次离心，去上清，加入1 mL BODIPY 581/591 C11染料工作液，37℃孵育20-30min，用PBS洗涤细胞2-3次，适量PBS重悬。

(3) 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用酶标仪或流式细胞仪分析。

3. 贴壁细胞

(1) 用PBS将加药处理好的6孔板细胞洗涤2-3次。（也可将细胞用胰酶消化重悬后进行后续实验）

(2) 加入1 mL BODIPY 581/591 C11染料工作液，37℃孵育20-30 min，用PBS洗涤细胞2-3次。

(3) 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用酶标仪或流式细胞仪分析。

4. 参数设置

(1) 荧光显微镜或共聚焦拍照：用PBS覆盖后，分别使用GFP和DsRed通道观察；

(2) 流式细胞仪分析：用无酚红胰酶将细胞消化后用PBS重悬后用FITC和PE通道测试；

(3) 酶标仪分析：建议使用黑色96孔板（货号LTP-96-BY），绿光检测波长500 nm/540 nm，红光检测波长565 nm/591 nm。

注意事项

1. 第一次使用时请分装成小包装后-20℃保存，避免反复冻融。

2. 血清、酚红对本荧光探针的检测有干扰，需避免。

3. 对于加药处理时间小于2 h的实验，建议先加探针孵育后再加药处理，效果更佳。

4. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）