产品信息

产品简介

2-NBDG 是一种荧光标记的脱氧葡萄糖类似物，2-NBDG与葡萄糖相同的葡萄糖转运蛋白（GLUT）转运到细胞中，一旦2-NBDG被细胞摄取，它就在C-6位置发生磷酸化，得到 2-NBDG-6-磷酸，它能很好地保留在细胞内。2-NBDG 因其修饰作用而无法在糖酵解过程中被充分利用，因此会在细胞内积聚，这种荧光葡萄糖类似物产生的荧光与细胞对葡萄糖的吸收成正比，可用于直接监测活细胞和组织对葡萄糖摄取活性，可使用于荧光显微镜，酶标仪和流式分析仪检测，其激发波长为488 nm，发射波长为530 nm。

本试剂盒提供的葡萄糖摄取检测试剂盒（2-NBDG荧光法）为10 mM储存液，适用于大多数细胞，为了得到更为满意的结果，可以适度调节染料浓度，2-NBDG染料的终浓度一般为10-200 μM，最优推荐终浓度为100 μM。本试剂盒提供额外Phloretin作为阴性诱导剂，通常使用浓度为1×。不同细胞的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行摸索最佳工作浓度作用时间。

储存与运输

干冰（Dry ice）运输；-80℃避光保存，12个月有效。

组成

操作步骤

1. 2-NBDG染色工作液配制：

用PBS将2-NBDG染料稀释到1×，如10 μL 2-NBDG（100×）加入到1 mL PBS中混合均匀，得100 μM 2-NBDG染色工作液，现配现用（不同细胞工作液浓度存在差别，可在10-200 μM范围内调整）。

2. 阴性对照设置（可选）

(1) 取适量Phloretin（1000×）用无糖无血清的培养基（推荐G4583）稀释1000倍，得到Phloretin工作液。

(2) 将Phloretin工作液加入提前准备好的细胞中，37℃孵育1h。

3. 细胞染色（以下为贴壁细胞方案，悬浮细胞换液需要离心操作）

(1) 正常或处理过后的细胞，用PBS洗涤2-3次。

(2) 加入2-NBDG染色工作液（使用量以液体完全覆盖皿底为准，如6孔板，建议加1 mL），37℃避光孵育20min（不同细胞孵育时间存在差异，可在10-60min范围内调整）。

(3) 用PBS洗涤细胞2-3次。

(4) 用荧光显微镜可直接观察，选择GFP通道即可激发；若用酶标仪检测，推荐使用黑底不透明发光板（货号LTP-96-BY）检测，设置激发波长488 nm，发射波长530 nm；流式细胞仪检测，选择FITC通道，贴壁细胞需消化后用PBS重悬。

注意事项

1. 第一次使用时请分装成小包装后-80℃保存，避免反复冻融。

2. 配置好的工作液在室温1 h内稳定，建议现配现用。

3. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！