产品信息

产品简介

细胞内pH值对许多细胞活动起着重要作用，例如细胞生长，酶活性，离子运输等过程。BCECF, AM是一种可渗透细胞的pH荧光染料，BCECF, AM本身并无荧光，进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切成BCECF，从而被滞留在细胞内。BCECF对细胞内pH敏感，在490 nm和440 nm波长激发所得到的发射荧光（530 nm）之比与pH有很好的线性关系，比值越高，则pH越高。BCECF, AM不仅被广泛用于哺乳动物细胞的研究，也有报道用于动物组织，植物细胞，细菌和酵母等的细胞内pH水平检测。

本试剂盒基于上述检测原理，以BCECF, AM为主体，并提供专门的配套缓冲液，使用方便，检测更灵敏。可用荧光显微镜、荧光酶标仪等对应的仪器来监测细胞内pH的动态变化。

储存与运输

干冰（dry ice）运输；-20℃避光干燥保存，12个月有效。

组成

注意：以上试剂盒反应次数对应96孔板检测体系。

操作步骤

1. 实验前准备工作：将细胞以一定密度提前接种于96孔板，并根据实验目的对细胞进行相应的前处理。

2. BCECF, AM检测工作液配制：根据需要配制BCECF, AM检测工作液，配制体系可参考下表，注意不同细胞特性不同，实验时可根据实际情况添加或减少探针的使用浓度，初次建议稀释比在1：500。

3. 染色标记（以贴壁细胞为例；悬浮细胞需每次离心换液）：

3.1. 去除原有细胞培养基，并使用PBS或其他缓冲液洗涤细胞1-2次。

3.2. 去除洗涤缓冲液，向每孔加入100 μL BCECF, AM检测工作液，避光于37℃细胞培养箱中孵育30 min。

3.3. 孵育结束去除BCECF, AM检测工作液，使用PBS或其他缓冲液洗涤细胞2-3次。注意：要将BCECF, AM检测工作液清洗干净。

3.4. 加入100 μL PBS或其他缓冲液，进行荧光检测。

4. 荧光检测：使用荧光酶标仪等相关仪器对细胞内pH水平进行检测分析。通常BCECF, AM应用到的双激发比值=A/B，（A为EX/EM=490/530 nm；B为EX/EM=440/530 nm），比值升高则pH升高，比值降低则pH降低。

注意事项

1. 由于不同细胞间性质以及前处理方式不同，步骤中描述的使用探针比例以及孵育时间范围仅供参考，可根据具体情况进行调整。

2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光操作，以减缓荧光猝灭。

3. BCECF, AM对湿度非常敏感，首次使用时，请根据实验安排适当分装，避免反复冻融。BCECF,AM检测工作液请现配现用。

4. 使用前充分震荡以确保其完全溶解。

5. 基于本探针的工作原理，不能对细胞进行固定或穿孔处理。

6. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！