产品信息

产品描述

Fluo-4是生物学钙离子检测实验中常用的Fluo-3的升级版，主要区别是Fluo-3 AM分子上的两个氯原子被Fluo-4 AM上的氟所取代，该结构上的微小变化可以使Fluo-4 AM加载更快，在相同浓度下检测信号更强。Fluo-4 AM探针由于AM基团不仅掩盖了Fluo-4螯合钙的分子部分且增强了其疏水性，因此可以使其轻易穿透活细胞膜进入到细胞内。当Fluo-4 AM进入细胞后会被细胞内酯酶剪切为Fluo-4，从而被滞留在细胞内。Fluo-4本身几乎没有荧光，但是当其与细胞内钙离子结合后，可产生较强的荧光。荧光强度和细胞内钙离子含量成正比。

本试剂盒主要基于上述检测原理，以Fluo-4 AM为主体，并提供专门配套的缓冲液，使用方便，检测更灵敏。可用荧光显微镜、流式分析仪、酶标仪等对应的仪器来检测活细胞钙离子含量或监控细胞内钙离子的动态变化。

储存与运输

干冰运输；-20℃避光保存，12个月有效。

试剂盒组成

注意：以上试剂盒反应次数对应96孔板检测体系。

操作步骤

1. 实验前准备工作：将细胞以一定密度提前接种于96孔板中，并根据实验目的对细胞进行相应的前处理；

2. Fluo-4 AM检测工作液配制：根据需要配制Fluo-4 AM检测工作液，配置制体系可参考下表，注意不同细胞特性不同，实验时可根据实际情况添加或减少探针的使用浓度，初次建议稀释比在1:500；

3. 染色标记（以贴壁细胞为例；悬浮细胞需每次换液，请自行进行离心操作）：

3.1. 去除原有细胞培养基，并使用PBS或其他缓冲液洗涤细胞2-3次；

3.2. 去除洗涤缓冲液，向每孔加入100 μL Fluo-4 AM检测工作液，避光于37℃细胞培养箱中孵育30 min；

3.3. 孵育结束去除Fluo-4 AM检测工作液，使用PBS或其他缓冲液洗涤细胞2-3次；

3.4. 更换成钙离子检测缓冲液，继续孵育15-30 min，以确保细胞内Fluo-4 AM充分水解（可选）；

4. 荧光检测：使用荧光显微镜、酶标仪或流式细胞仪等仪器对细胞内钙离子水平进行检测分析。Fluo-4 AM为绿色荧光，EX/EM≈494/528 nm。

注意事项

1. 由于不同细胞间性质以及前处理方式不同，步骤中描述的使用探针比例以及孵育时间范围仅供参考，可根据具体情况进行调整。

2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光操作，以减缓荧光猝灭。

3. Fluo-4 AM对湿度非常敏感，首次使用时，请根据实验安排适当分装。Fluo-4 AM检测工作液需现配现用。

4. 解冻后有部分沉淀析出，属于正常现象，使用前充分震荡以确保其完全溶解。

5. 基于本探针的工作原理，不能对细胞进行固定或穿孔等处理。

6. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！