该产品利用荧光素酶系统，试剂可渗透3D细胞球状体，细胞裂解释放ATP的量间接反映活细胞数量，实现活细胞定量检测。本产品为即用型溶液，使用操作简单，加入后简单孵育即可进行检测，适合大规模样品的高通量筛选。适用于细胞悬滴培养板、超低吸附培养板、基质胶包被和琼脂糖包被培养得到的3D细胞球。

检测3D细胞活力中，细胞培养时建议使用swe基质胶（G4132和G4133），培养检测效果更好。

产品信息

产品简介

3D细胞活力检测试剂盒(ATP发光法)，是一种基于荧光素酶系统的细胞活力检测试剂。检测试剂经优化具有更强的裂解能力，可有效渗透至3D培养形成的球状体内部，用于检测 3D 细胞培养产生的微组织 (microtissue) 的细胞活力。在细胞培养物中加入产品使细胞团裂解，释放出ATP，即可发出稳定的“辉光型”发光信号，信号强度与ATP的量在一定范围内成正比，间接反映样品中活细胞数量，因此产品可对活细胞数目进行定量检测。

本产品经过优化，非常适合各种培养方式得到的3D细胞球的活力检测，如细胞悬滴培养板、超低吸附培养板、基质胶包被和琼脂糖包被培养得到的3D细胞球。本产品为即用型溶液，即开即用，无需再进行任何的配制操作，加入细胞后，简单孵育即可进行检测，非常适合大规模样品的高通量筛选。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-80℃避光保存，12个月有效。

组成

操作步骤

1. 细胞活力/增殖/毒性检测

1.1. 细胞准备：在96孔板中接种一定数量的细胞悬液100 µL（如使用384孔板，每孔接种25 μL细胞），根据培养方法、培养天数、需要的3D细胞球状体的大小等确定细胞接种量和接种时间，如有需要，可加入药物处理细胞。

1.2. 试剂准备：试剂溶解后，适当分装该试剂，避免反复冻融。在使用前将适量试剂平衡至室温。上下颠倒轻柔混匀，以获得均质溶液。

1.3. 检测时，将细胞培养板平衡至室温（约10 min）。将与细胞培养基等体积的试剂直接加入到细胞培养物中（如：96孔板每孔含100 μL 培养基，加入100 μL ATP发光法3D细胞活力检测试剂；384孔板每孔25 μL），室温振荡5分钟，以促进细胞的裂解。

1.4. 室温(约25℃)孵育25分钟，使发光信号趋于稳定。

1.5. 使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数，每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间，具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。

1.6. 根据化学发光读数直接计算细胞的相对活力，或根据ATP标准曲线计算出ATP的量从而计算出细胞的相对活力。

2. 活力计算：

细胞活力（％）=[A_实验－A_空白]／[ A_对照－A_空白]×100

抑制率（％）=[A_对照－A_实验]／[ A_对照－A_空白]×100

A_实验：处理过的细胞+ATP发光法细胞活力检测试剂

A_空白：细胞培养基（无细胞）+ ATP发光法细胞活力检测试剂

A_对照：正常无处理的细胞+ ATP发光法细胞活力检测试剂

注意事项

1. 反复冻融会降低检测效果。为取得良好的使用效果，第一次解冻后可适当分装保存，但需注意分装的容器不能有ATP污染，长期保存需存放于-80℃。

2. 萤光素酶的活性对温度比较敏感，因此反应前细胞和检测试剂均需平衡至室温后再进行测定。可将检测试剂在不超过25℃的室温或20-25℃的水浴中融解并混匀后使用。

3. 检测时需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔 板，相邻孔之间会产生相互干扰。也可使用专为3D培养的超低吸附培养皿或多孔板培养好3D细胞后，转移至普通的白色或黑色多孔板中进行检测。

4. 待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应，从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试，最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。

5. 如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

6. 对于3D培养的细胞，接触抑制对细胞增殖产生的影响以及大型细胞球状体中央区域代谢活性降低或者细胞坏死的影响，会导致细胞接种培养数天后进行活力测定的化学发光信号强度和细胞的接种数量之间的关系通常为曲线，但是发光信号的强度会随着种板细胞数量的增加而升高。

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）