WST底物被活细胞中的脱氢酶还原成橙黄色甲臜，在450nm处吸收峰最大，其量与细胞数量和增殖成正比。本产品为即用型，无毒性，可在不同时间用酶标仪反复读数，便于找到最佳测定时间。优化后适合3D细胞球活力检测，包括悬滴、超低吸附、基质胶和琼脂糖包被培养的细胞。

检测3D细胞增殖中，细胞培养时建议使用swe基质胶（G4132和G4133），培养效果更好。

产品信息

产品描述

3D细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒(WST-8法）是一种方便且灵敏的用于3D细胞的增殖/毒性测定试剂盒。其使用了WST系列的反应底物，在电子耦合试剂存在下，可被活细胞中丰富的脱氢酶还原成具有水溶性的橙黄色甲臜化合物，该物质在450 nm处有最大吸收峰。。脱氢酶产生的甲臜的量与活细胞的数量及细胞的活力呈直接的线性关系。

酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响，本产品对细胞无明显毒性。加入CCK-3D溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间，同时本产品为即用型溶液，适用于在450 nm左右测定吸光度,通常约1小时即可完成检测。本产品经过优化，非常适合各种培养得到的3D细胞球的活力检测，如细胞悬滴培养板、超低吸附培养板、基质胶包被和琼脂糖包被培养得到的3D细胞球等。

按照96孔板每孔100 μL细胞培养体系需要10 μL CCK-3D溶液，本试剂盒每1 mL可以进行100次检测；5 mL则可进行500次检测。

储存与运输

冰袋(Wet ice)运输；-20℃保存；12个月有效。

组成

操作步骤

1. 细胞接种：对于细胞增殖实验，在96孔板中每孔接种100 μL细胞悬液（约2000个细胞/孔）；对于细胞毒性实验，在96孔板中每孔接种100 μL细胞悬液（约3000-5000个细胞/孔）。细胞接种量可以根据具体实验时的孔板大小、培养天数、需要3D细胞球状体的大小等确定。根据3D细胞培养方案进行培养，同时需要设置空白组（仅含有培养基）。

2. 药物处理（可选）:根据实验需求可向实验组加入药物处理细胞一定时间。

3. 加入试剂：96孔板，每100 μL培养基中加入10 μL WST-8法3D细胞增殖与细胞毒性检测试剂，每200 μL培养基中加入20 μL，尽量避免产生气泡。

4. 孵育：放入培养箱孵育0.5-3h（一般1h即可）。

5. 检测：轻轻晃动96孔板，随后使用酶标仪检测OD450 nm处的吸光度。如无450 nm滤光片，可以选择420-480 nm的滤光片。如有需要可用使用大于600 nm的波长，如650nm，作为参比波长进行双波长测定。

6. 数据分析：

细胞活力（％）=[A_实验－A_空白]／[ A_对照－A_空白]×100

抑制率（％）=[A_对照－A_实验]／[ A_对照－A_空白]×100

A_实验：具有细胞、CCK-8 溶液和药物溶液的孔的吸光度

A_空白：具有培养基和 CCK-3D溶液而没有细胞的孔的吸光度

A_对照：具有细胞、CCK-3D 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

注意事项

1. 如每次使用的CCK-3D溶液较少，可能要涉及多次的反复冻融，请视情况分装，尽量避免CCK-3D溶液多次反复冻融，-20℃或-80℃保存。

2. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测。

3. 培养基中酚红和血清对结果无影响，其吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

4. 由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

5. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

6. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）