产品信息

产品简介

CFDA SE是二乙酸荧光素（FDA）的衍生物，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，本身不具有荧光发光性，当通过被动运输进入活细胞后，可被胞浆内的酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（CFSE），发出强烈的绿色荧光，共价结合的荧光分子很少从细胞内脱落。CFDA SE染料可用于检测细胞增殖，CFDA SE可随着细胞的分裂增殖而被子代细胞均匀继承，其含量的衰减与细胞分裂次数成正比，该荧光信号可在 488 nm的激发光下进行检测，并可通过流式细胞仪进行分析。

本试剂盒，是一款使用荧光探针CFDA SE对细胞增殖进行荧光示踪检测的试剂盒，相比MTT法或[3H]-thymidine掺入等其它细胞增殖检测方法，具有更稳定，更灵敏，细胞毒性更低的优势，经CFDA SE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且不会使邻近细胞染色。CFDA SE标记的细胞呈绿色荧光，Ex=494 nm，Em=521 nm，可以用流式细胞仪或者荧光显微镜进行检测。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃避光保存，12个月有效。

组成

操作步骤

1. 染色前准备

(1) CFDA SE 储存液（2000×）的配制：CFDA SE荧光探针，10000 rpm离心1 min使干粉沉于管底，取1 mL CFDA SE溶剂加入到CFDA SE荧光探针中，涡旋溶解并混匀。

注意：配制CFDA SE储存液需在超净工作台中避光操作，配制后可按照每次实验需求用量进行分装，置于-20°C 冰箱中密封避光保存，并于1个月内使用完，最长不宜超过2个月；-70℃避光保存可以适当延长使用时间。

(2) CFDA SE染色缓冲液（1×）的配制：准备适量无菌的超纯水，根据实验需要配制适量的CFDA SE细胞染色缓冲液（1×）。例如：取1 mL CFDA SE细胞染色缓冲液（10×），加入9 mL无菌超纯水，混匀后即为CFDA SE细胞染色缓冲液（1×）。配制好的CFDA SE细胞染色缓冲液（1×）可以4℃保存，长时间不用可以-20℃保存。

(3) CFDA SE染色工作液的配制：取1 μL CFDA SE储存液（2000×）至2 mL CFDA SE染色缓冲液（1×）中，混匀后即为CFDA SE染色工作液，现配现用。

2. 细胞染色

(1) 在15 mL离心管中收集100万至500万个细胞，PBS清洗一次，200g离心5分钟，弃上清，加入1 mL CFDA SE染色工作液，将管内细胞重悬。

(2) 37℃孵育10分钟。

(3) 加入约10 mL完全细胞培养液（含血清），室温颠倒数下混匀。

(4) 室温200g离心5分钟，弃上清，再用5-10 mL完全细胞培养液洗涤一次。

(5) 再加入5-10 mL完全细胞培养液，37℃孵育5分钟，以促进CFDA SE在细胞内的驻留及未反应的CFDA SE进入完全细胞培养液。

(6) 200g离心去上清，完成最后一次洗涤，随后即可按照细胞的正常培养方法进行培养。

3. 细胞增殖检测

可以在合适的时间点，直接用荧光显微镜观察标记效果；也可以在培养适当时间后用流式细胞仪检测细胞增殖。或将标记后的细胞移植到活体动物，用荧光进行示踪。

标记的细胞呈绿色荧光；激发波长Ex=492 nm（荧光FITC滤片/488 nm流式激发光），发射波长Em=517 nm。

注意事项

1. CFDA SE干粉较稳定，配制储存液后应分装并置于-20°C冰箱中密封避光保存，并于1个月内使用完。

2. 不同细胞的内酯酶活性不同，因此染色效果具有差异性。可根据细胞类型及培养条件摸索最佳工作浓度，可使用0.5×~2×的染料浓度染色测验。

3. 试剂中含有荧光染料，保存或进行标记时尽量避光操作，以避免荧光淬灭问题。

4. 若需要对细胞进行固定，请用醛类固定剂如3.7%多聚甲醛于室温固定15 min；之后若还需要进行其他如抗体标记，请用冰丙酮透化处理细胞10 min。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！