产品信息

产品简介

CCK-8高灵敏快速检测试剂盒，简称CCK-8 plus，是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测试剂盒。其检测原理在于，在电子耦合试剂存在的情况下，溶液中的WST-8化合物被活细胞内脱氢酶还原成具有水溶性的橙黄色甲臜化合物，该物质在450 nm处有最大吸收峰。甲臜量与活细胞数成正比，即细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

本试剂盒在常规CCK-8试剂盒基础上进行优化，仅需0.5至1小时即可完成检测，检测速度更快、灵敏度更高、线性范围更宽。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；2-8℃保存12个月有效；长期不用也可-20℃保存，24个月有效；建议避光保存。

组成

操作步骤

细胞活力/增殖/毒性检测

1. 在96孔板中接种一定数量的细胞悬液100 µL，于培养箱（37℃，5% CO2）预培养24小时。

2. 向培养板加入不同浓度的待测物质，孵育适当的时间（如：6、12、24、48或72小时）。

3. 向每孔加入10 µL CCK-8 plus试剂（注意不要在孔中产生气泡，它会影响吸光值）。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8 plus之前更换新鲜培养基，以去掉药物影响。

4. 将培养板在培养箱内孵育0.5-2小时（对于大多数情况孵育0.5-1小时左右就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、1.5、2和3小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验）。

5. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度（可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定）。

6. 如果暂时不检测OD值，可以向每孔中加入10 µL 0.1M 的 HCl 或者1% SDS (W/V)溶液，避光保存在4℃条件，在24小时内吸光度不会发生变化。

活力计算：

细胞活力（％）=[A(实验孔)－A(空白孔)]／[A(对照孔)－A(空白孔)]×100%

细胞抑制率（％）=[A(对照孔)－A(实验孔)]／[A(对照孔)－A(空白孔)]×100%

A（实验孔）：含细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度

A（空白孔）：含培养基、CCK-8溶液、药物，而没有细胞的孔的吸光度

A（对照组）：含细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

注意事项

1. 本试剂盒检测原理是依赖于脱氢酶催化的反应，样品中如有较多还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测，需设法去除。

2. 大多数情况下，CCK-8高灵敏快速检测试剂加入细胞后仅需孵育0.5-1小时就可以获得理想的信号值，但不同的细胞类型和细胞密度等实验条件下，所需的孵育时间可能存在一定的差别。

3. 如果没有450 nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450 nm检测灵敏度最高。

4. 培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

5. 加检测试剂时避免产生气泡，否则会干扰检测结果。

6. 当试剂从-20℃解冻时，建议4℃或者常温解冻，不建议37℃解冻。可分装保存，避免反复冻融。

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）