产品信息

产品简介

MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide)，中文名简称：噻唑蓝。分子式为C₁₈H₁₆BrN₅S，分子量为414.32。

MTT常用于检测细胞毒性和细胞增殖，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，死细胞无此显色反应。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶标仪测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶甲臜形成的量与细胞数成正比。

传统MTT检测方法中，由于产生的甲臜是不溶于水的，需要先将上层含MTT底物的反应液移除，再加入DMSO溶解甲臜，此步操作容易造成实验的重复性、可现性较差。本试剂盒提供特殊的甲臜溶解剂，检测时无需移除原有的含MTT底物反应液，而是直接加入甲臜溶解剂，即可溶解甲臜，从而避免移除原有反应液导致的误差。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；MTT溶液，-20℃避光保存；甲臜溶解剂，4℃避光保存；有效期12个月。

产品组成

操作步骤

1. 对于细胞增殖检测，每孔建议种板100 μL 2000个细胞；对于细胞毒性实验，每孔建议种板100 μL 5000个细胞（具体视细胞大小、增殖速度调整）。根据实验需要进行培养及转染或给药预处理。

2. 每孔加入10 μL MTT溶液，置于培养箱中孵育4 h。

3. 向孔板内加入100 μL甲臜溶解剂，轻敲孔板使其混匀，置于培养箱中继续孵育2-4 h，使甲臜溶解（孵育时间视细胞数量调整，可在显微镜下观察待甲臜溶解即可检测）。

4. 在570 nm处测量各孔的吸光值。如无570 nm滤光片，可以使用560-600 nm滤光片。

注意事项

1. 使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；也可以通过把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方来缓解蒸发。

2. 为减少实验操作导致的误差，建议设置复孔，在加样或者震荡混合时，避免产生气泡。

3. MTT溶液为黄色，使用前需避光室温放置或20-25℃水浴片刻至全部融解后使用。长时间光照会导致失效，如果溶液呈灰绿色，请勿使用。

4. 甲臜溶解剂如果有沉淀析出，可以室温或37℃水浴以促进溶解，待溶解混匀后再使用。

5. 为了您的健康和安全，操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）