产品信息

产品描述

ATP是细胞内重要的能量分子，在细胞的各类生理生化活动中起着重要的作用，被称为生物体内能量货币。细胞状态和细胞数量与ATP之间，呈现出一定的相关性。因此，可通过ATP的相对水平来评估细胞的数量或活力。

本试剂盒基于ATP依赖性荧光素酶催化荧光素产生荧光原理，可有效对细胞内ATP水平进行检测评估。荧光法相比CCK-8、MTT等吸光法为代表的传统细胞数量和活力检测方式，具有检测灵敏度高、范围广等优势。此外本试剂盒使用方便，无需洗涤、无需换液、无需长时间孵育，即可快速检测评估细胞数量或活力。

储存与运输

干冰运输；-80℃避光保存，12个月有效；-20℃避光保存，建议6个月内使用。

试剂盒组成

操作步骤

1. 细胞前处理工作：将细胞以一定密度接种于96孔板中（请选择白色不透光孔板；若使用普通透光96孔板，请在样品孔之间设置间隔，以减少临近孔之间相互干扰）并根据实验目的对细胞进行相应的前处理；

2. ATP标准品样品准备（可选）：将ATP标准品（自备）使用PBS等缓冲液或基础培养基进行梯度稀释，并以100 μL/孔加入到孔板中；

3. 细胞活力检测：

3.1. 将ATP发光法细胞活力检测试剂提前拿出，解冻并恢复至室温；

3.2. 取出细胞培养板，于室温平衡5-10 min；

3.3. 将ATP发光法细胞活力检测试剂以100 μL/孔直接加入到孔板中；

3.4. 酶标仪水平震荡1-2 min或者轻敲混匀；

3.5. 静置3 min后，即可使用Luminometer发光计、带化学发光检测模块的多功能酶标仪或其它能够检测生物发光的仪器，进行化学发光检测；

4. 数据分析：以下数据分析整体在减去背景空白对照的基础上 

4.1. 相对细胞数目（增值）分析：根据荧光强度数值高低，判断细胞数目的多少。

4.2. 细胞活力计算（细胞增殖活力或细胞毒性活力）：

注： A（加药组）：处理过的细胞+ATP发光法细胞活力检测试剂

A1（不加药组）：正常无处理的细胞+ ATP发光法细胞活力检测试剂

A0（空白对照组）：细胞培养基（无细胞）+ ATP发光法细胞活力检测试剂

4.3. ATP含量定量分析（可选）：

4.3.1. 将检测到的ATP标准曲线荧光强度值减去空白对照组荧光强度值数据，使用Excel等软件绘制标准曲线，并得到公式：

其中，a代表斜率，b代表截距。

4.3.2. 根据公式计算检测体系中X值（ATP含量）：

将4.3.1中的斜率a及截距b代入上式中计算得到Y值。

4.3.3. 样品中ATP含量计算：

注意事项

1. 为确保检测试剂使用效果，建议分装小份保存，避免反复冻融。

2. 检测时间经量控制在5-30 min以内，以确保检测数据的准确性。

3. 试剂解冻后有部分沉淀析出，属于正常现象，使用前充分震荡以确保其完全溶解。

4. 尽量避光操作且添加检测试剂的时间尽量控制在短时间内，建议使用排枪进行加样，并注意排枪各孔的吸液量是否一致。

5. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！