产品信息

产品简介

小麦胚芽凝集素（WGA）是一种与N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸结合的凝集素。它是目前研究最多、 应用最广泛的一类凝集素。WGA与糖缀合物结合，其衍生物和缀合物被广泛用于标记细胞膜和纤维化瘢痕组织，用于荧光成像和分析。WGA的碳水化合物结合特异性针对β-1,4-GlcNAc连接的残基序列，即壳糊精。每个单体含有两个相同的、非相互作用的结合位点，它们与3或4个β-1,4-GlcNAc单元互补。在检测的单糖中，只有GlcNAc与WGA结合，ManNAc不结合，GalNAc仅弱结合。WGA与含有Gal β（1-4）GlcNAc β（1-3）（即聚氨基乳糖型聚糖）重复序列的大型低聚糖中的内部GlcNAc残基具有高亲和力结合。N-乙酰神经氨酸仅参与WGA的低亲和力相互作用。WGA显示出复杂的糖特异性模式，可用于复杂碳水化合物的结构分析。WGA的iFluor®555缀合物能表现出iFluor®555染料的明亮和红色荧光。iFluor®555- WGA缀合物与唾液酸和N-乙酰葡糖胺基残基结合，与AF555 WGA偶联物一样。

小麦胚芽凝集素 (WGA) 是一种36kDa的凝集素，由于它可与细胞膜上的N-乙酰基-β-D-葡糖胺基残基和N-乙酰基-β-D-葡糖胺低聚物偶联的特性，通常用于标记哺乳动物细胞、革兰氏阳性菌和酵母的细胞膜，以及心肌细胞膜等。当WGA用于心肌细胞染色时，可将心肌细胞细胞膜染出来，这样是不是肥大的细胞从图像与正常组的对比就可以看出，也可以用专门的软件对染出的细胞进行直径、面积等的测量，能够分析心肌细胞是否肥大。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。

组成

实验前准备

1. 自备1×PBS缓冲液（pH 7.2-7.4，推荐G4202），含3.0-4.0%甲醛的固定液（推荐G1101，含4% PFA），抗荧光淬灭封片剂（推荐G1401），即用型DAPI染色液（推荐G1012）等。

2. 第一次使用本产品时，将充分融化的本产品低速离心1 min，防止液体管壁损失。建议根据单次实验使用量进行分装，防止溶剂挥发损失。置于-20℃避光保存。

3. 正式实验前，吸取5 μL iF555-Wheat Germ Agglutinin（WGA，红光）与1 mL PBS混匀，即得到iF555-WGA工作液。不同类型的细胞染色效果可能不同，最佳染色工作浓度请参考文献或进行预实验摸索。iF555-WGA工作液现配现用，室温避光保存，当天使用。

操作步骤

活细胞染色（以12孔板为例）

1. 用1×PBS缓冲液清洗细胞2次。

2. 每孔细胞加入100 μL iF555-WGA工作液，37℃下避光孵育10-30 min。注意密封，防止液体蒸发。

3. 孵育完成后，用1×PBS缓冲液缓冲液清洗细胞3次，每次5 min。

4. 以荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果。

固定细胞染色（以6孔板细胞爬片为例）

1. 培养好的细胞爬片（密度至少达到50%汇合度），去除培养液，用37℃预热的1×PBS缓冲液清洗细胞2次。

2. 加入适量固定液覆盖细胞，室温固定10-30 min。

3. 吸除固定液，用1×PBS缓冲液室温清洗细胞2-3次，每次10 min。

4. 细胞爬片稍微甩干后，用组化笔画圈使细胞位于圈中央。取100 μLiF555-WGA工作液完全覆盖细胞，37℃避光孵育30 min。注意密封，防止液体蒸发干片。

5. 孵育完成后，用1×PBS缓冲液清洗细胞3次，每次5 min。

6. （可选做）向爬片上滴加即用型DAPI染色液覆盖细胞，进行细胞核染色8 min。用1×PBS缓冲液清洗细胞2-3次，每次30 s-1 min。

7. 细胞爬片稍甩干后，倒置在滴加一滴抗荧光淬灭封片剂的载玻片上，用纸巾吸掉多余封片剂。

【注意】步骤6和7，可采用含DAPI的抗荧光淬灭封片剂（推荐G1407）代替，同时完成染核和封片。

8. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果，选择555（Ex/Em=493/517 nm）和DAPI（Ex/Em=364/454 nm）通道。

组织切片染色

1. 组织切片前处理：

冰冻切片（新鲜组织冰冻切片或固定组织冰冻切片）室温静置数分钟，恢复至室温；切片浸没在固定液中室温固定10-15 min，取出自然晾干，然后以纯水或1×PBS缓冲液中润洗，去掉组织上残存的固定液。

石蜡切片脱蜡复水；

将组织切片（石蜡切片或固定组织冰冻切片）置于盛满EDTA抗原修复缓冲液（pH 8.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火8 min停火8 min转中低火7 min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于1×PBS缓冲液中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5 min。

2. 染色：组织切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈。向圈内滴加50-100 μLiF555-WGA工作液覆盖组织，37℃避光孵育30 min。注意密封，防止液体蒸发干片。

3. 洗涤：孵育完成后，用1×PBS缓冲液清洗样本3次，每次5 min。

4. 染核（可选）：向样本上滴加即用型DAPI染色液覆盖细胞，进行细胞核染色8 min。用1×PBS缓冲液清洗样本2-3次，每次30 s-1 min。

5. 封片：切片稍甩干后，在样本上滴加一滴抗荧光淬灭封片剂，用合适的盖玻片进行封片。

【注意】步骤4和5，可采用含DAPI的抗荧光淬灭封片剂（推荐G1407）代替，同时完成染核和封片。

6. 镜检：荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果，选择555（Ex/Em=556/574 nm）和DAPI（Ex/Em=364/454 nm）通道。

注意事项

1. 经过长时间固定后的样本（如石蜡切片），必须经过高温修复过程，否则阳性结果偏弱或接近于无。

2. WGA染色做心肌分析时对心肌组织要求较高，必须保证组织完整、均匀，最好提供石蜡切片的标本。

3. 对于细胞样本，染色前避免使用通透液，否则会造成细胞质结构成分着色。

4. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快完成检测及观察拍照。

5. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！