产品信息

产品描述

MitoTracker Red CMXRos（线粒体红色荧光探针）是一种X-rosamine的衍生物，可以直接进入活细胞，并定位于线粒体上，且能够与线粒体共价结合。探针工作原理为带正电荷的探针骨架，可将探针定位于带负电荷的线粒体上，而探针上的氯甲基基团可以与线粒体中的游离巯基共价结合，起到荧光标记的作用；只需简单的将其同活细胞共同孵育一定的时间，即可标记细胞线粒体，且在线粒体标记后，能够进一步经固定和穿孔等处理，用于后续多标实验。

储存与运输

干冰(dry ice)运输；-80℃避光保存，6个月有效。

试剂盒组成

操作步骤

1 检测工作液配制：

1.1 本产品为1 mM存储液，实验前回温至室温，短暂低速离心，确保试剂沉置管底；

1.2 如果染色后直接检测：建议将其经缓冲液（Hanks、PBS等，建议使用Hanks）或基础培养基（不含血清），稀释成0.1-0.25 μM的线粒体检测工作液；

1.3 如果染色后需要固定穿孔等后续操作：建议将其经缓冲液或基础培养基（不含血清），稀释成0.4-0.6 μM的线粒体检测工作液；

2 细胞染色（以下为贴壁细胞方案，悬浮细胞换液需要离心操作）：

2.1 将细胞种于细胞培养板或者细胞爬片上，待其汇聚至一定程度；

2.2 吸除细胞培养液，用预热的缓冲液清洗1-2次，每次3-5 min；

2.3 加入预热的线粒体检测工作液，于细胞培养箱中，37℃孵化30 min（由于细胞种类和状态不同，可以对孵化时间进行一定的调整）；

2.4 去除孵化液，用缓冲液清洗2-3次，每次3-5 min；

2.5 直接或用抗荧光淬灭封片液（推荐G1401）封片后于荧光显微镜下观察（Ex=579 nm，Em=599 nm）；

3 细胞固定和穿孔以及其他操作（可选）：

注意：本产品染色后，可以进行固定、穿孔等操作，但是固定后荧光信号会衰减；

3.1 细胞固定

3.1.1 将染色、洗涤处理过后的细胞，加入固定液（推荐G1101），室温固定10 min；

3.1.2 去除固定液，用缓冲液清洗2-3次，每次3-5 min；

3.2 细胞穿孔

3.2.1 将固定、洗涤过后的细胞，加入0.2-0.5% Triton X-100，室温穿孔10 min；

3.2.2 去除穿孔液，用缓冲液清洗2-3次，每次3-5 min；

3.3 细胞经染色后固定、穿孔处理后，可以用于接下来的多标等实验。

注意事项

1. 由于细胞的种类和状态不同，染料的工作浓度以及孵化的时间，可以进行适当调整。

2. 该染料需要活细胞状态下，进行线粒体定位，不可先固定细胞，否则会导致定位不准的假阳性结果。可以在活细胞染色后进行固定以及后续操作。

3. 在对活细胞进行染色和洗涤时，检测工作液和洗涤缓冲液需37℃预热，染色及洗涤通过在培养箱中孵育完成，以免温差刺激影响细胞形态。

4. 为了防止荧光淬灭，整个染色过程需避光操作。

5. 探针母液需分装保存，避免反复冻融；为了避免浪费，染色工作液按需配制，现配现用。

6. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）