DiD染料是一种亲脂性荧光染料，主要用于细胞膜和其他脂溶性生物结构的染色，具有高荧光信号、不易淬灭、自身荧光干扰小等优势，可以用于细胞和组织染色、多色成像、活体成像以及细胞示踪等实验。细胞染色实验中，建议使用无菌PBS缓冲液（G4250-500ML），超低内毒素，有效防止微生物污染，避免细胞因污染而死亡或代谢异常，从而确保细胞在染色过程中保持良好的生理状态。

产品信息

产品描述

DiD染料是亲脂性荧光染料家族成员之一，它可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当DiD与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，它们具有高消光系数，极性依赖性荧光和短激发态寿命。一旦对细胞染色，染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiD（远红色荧光）可以用来对活细胞进行成像和流式分析。DiD最大激发波长为644 nm，最大发射波长为663 nm，有着比DiI（一种常见的细胞荧光染料）更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。此外DiD探针一般不影响细胞的生存能力，故可正向或逆向的标记细胞或某些物质（外泌体）用作示踪检测。

本产品DiD细胞膜远红外荧光染色试剂盒，包含DiD荧光探针及优化的染色缓冲液，使细胞膜染色更加快速、荧光更加明亮稳定、效果更好。DiD染色前后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，推荐使用0.5% Saponin通透，但会影响DiD在细胞膜的定位并会增加细胞内的染色。

储存与运输

干冰运输；-20℃避光保存，有效期6个月。

试剂盒组成

操作步骤

1. DiD染色工作液配制：

1.1. 将DiD探针与染色缓冲液以1:500比例混合稀释，配制成DiD染色工作液（注意，现配现用，最优探针稀释浓度为1×，可在0.8×~1.2×适度调整，以获得最佳染色效果。

2. 悬浮细胞染色：

2.1. 收集悬浮细胞，以500-1000 g室温离心3-5 min，去除细胞上清。

2.2. 使用DiD染色工作液重悬细胞，使细胞密度在1-2×10⁶个/mL。

2.3. 置于37℃避光孵育5-20 min（建议根据具体细胞调整染色时间，以获得最佳染色效果，首次孵育建议选择20 min）。

2.4. 孵育结束后，500-1000 g室温离心3-5 min，吸除DiD染色工作液。

2.5. 用37℃预热的PBS或细胞培养基重悬细胞，500-1000 g离心3-5 min，去除上清。

2.6. 重复2.5步骤一次。

2.7. 流式细胞仪上机检测，或将细胞转移至多孔板、细胞培养皿或者载玻片上，在荧光显微镜下观察。DiD最大激发波长644 nm，最大发射波长663 nm。

3. 贴壁细胞染色（6孔板为例）：

3.1. 将细胞提前以一定密度种植于6孔板中。

3.2. 吸除细胞培养基，用PBS（G4202）洗涤细胞2次。加入1 mL DiD染色工作液（其他规格孔板，视情况调整，保证染料覆盖细胞）。

3.3. 置于37℃避光孵育5-20 min，吸除DiD染色工作液。建议根据具体细胞调整染色时间，以获得最佳染色效果，首次孵育建议选择20 min。

3.4. 用37℃预热的PBS或细胞培养基，洗涤细胞1-2次。

3.5. 加入37℃预热的PBS或细胞培养基，荧光显微镜下观察。DiD最大激发波长644 nm，最大发射波长663 nm。

注意事项

1. 荧光染料均存在淬灭问题，请注意避光以减缓荧光猝灭。

2. 探针亲脂性的特点，实验过程中请避免使用含有甘油或其它有机物的试剂，否则会影响染色效果。

3. 当需要固定操作时，样品宜在4%多聚甲醛中进行固定，其他不适当的固定液会导致荧光背景高。

4. 由于细胞间敏感性和实验目的的不同，探针的稀释比和孵育时间需根据实际情况适当调整。

5. DiD探针（500×）应分装后保存，避免反复冻融。

6. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！