通过MDC荧光染色观察细胞自噬体的动态变化，用于监测细胞自噬的形成。MDC染料激发波长为335nm（330-360nm均可），发射波长为512 nm（510-540nm均可）可根据实验方案选择不同规格赛维尔细胞培养板进行检测实验。

产品信息

产品简介

细胞自噬（Autophagy），是细胞内环境中的一种降解和循环的机制，通过溶酶体降解自身受损或多余的细胞器和蛋白质等物质，，从而维持细胞内环境稳定，为细胞提供能量和营养物质。在应对饥饿、缺氧和病原体感染等应激状态时，细胞自噬发挥重要保护作用，与多种疾病发生发展密切相关（如神经退行性疾病、癌症、代谢综合征等）。

本产品是一款基于MDC染色原理的细胞自噬检测试剂盒，主要成分是丹酰尸胺，又称单丹磺酰尸胺（Monodansylcadaverine, MDC）。MDC是一种嗜酸性的荧光色素，可通过离子捕获方式（ion trapping）和膜脂的特异性结合，从而特异性标记自噬体（Autophagosome）。推荐的激发波长为335 nm (330-360 nm均可)，发射波长为512 nm (510-540 nm均可）。

本产品可用于活细胞或者组织的自噬荧光染色，不能用于冻存的或固定的细胞、组织或者组织切片的染色检测。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；MDC染料（100×）-20℃保存，12个月有效；MDC染料稀释液2-8℃保存，12个月有效。

组成

操作步骤

一、实验前准备

1. 提前准备未经诱导自噬的对照细胞和处理诱导自噬的细胞，诱导自噬推荐自噬诱导剂（G2273），也可根据实验需求自行准备。

2. 取出MDC染料（100×）和MDC染料稀释液，恢复室温后按照MDC染料（100×）：MDC染料稀释液=1：100的体积比，混合配制形成MDC染料工作液（1×），避光室温放置备用。

3. 提前准备HBSS或PBS缓冲液，平衡至室温，用于细胞清洗。

二、贴壁细胞染色（以6孔板为例）

1. 诱导自噬结束后，吸出并丢弃6孔板中液体，用缓冲液洗涤1-3次。后续染色操作请注意避光。

2. 吸出并丢弃缓冲液，每孔加入1 mL的MDC染料工作液（1×），转移细胞至37ºC细胞培养箱中避光孵育10 min-30 min。

3. 吸出并丢弃MDC染料工作液（1×），用缓冲液洗涤1-3次。

4. 吸出并丢弃缓冲液，再加入1 mL缓冲液保湿。

5. 使用荧光酶标仪进行荧光检测；或在荧光显微镜下用紫外激发光激发，观察绿色荧光。推荐的激发波长为335 nm (330-360 nm均可)，发射波长为512 nm (510-540 nm均可)。

三、悬浮细胞染色

1. 诱导自噬结束后，收集悬浮细胞，1000 rpm室温离心5 min，去除离心上清液，用缓冲液洗涤1-3次。后续染色操作请注意避光。

2. 吸出并丢弃缓冲液，每50-100万个细胞加入1 mL的MDC染料工作液（1×），重悬细胞，细胞放置于37℃细胞培养箱中避光孵育10 min-30 min。

3. 1000 rpm室温离心5 min，去上清，吸出并丢弃MDC染料工作液（1×），加入缓冲液洗涤1-3次。

4. 吸出并丢弃缓冲液，再加入0.5 mL缓冲液重悬保湿。

5. 使用荧光酶标仪进行荧光检测；悬浮细胞可以进行细胞涂片，在荧光显微镜下用紫外激发光激发，观察绿色荧光。推荐的激发波长为335 nm (330-360 nm均可)，发射波长为512 nm (510-540 nm均可)。

注意事项

1. 本产品MDC染料有一定的毒性，请小心操作和注意防护。

2. 诱导自噬后，细胞状态会变差，MDC染色后，出现贴壁细胞变圆、脱落是正常现象。可以使用多聚赖氨酸、明胶等预处理细胞培养板，然后再进行细胞培养。

3. MDC对光照特别敏感，操作过程中请尽量注意避光。

4. 染色过强，可以考虑缩短染色时间；染色过弱，可以考虑适当延长染色时间。

5. 本产品染料嗜酸，染色时正常的细胞也会有一定的染色背景。

6. 本产品不能用于冻存或固定的细胞、组织或者组织切片的染色检测。

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！