产品信息

产品简介

外泌体是由细胞主动分泌到胞外的大小均一、粒径在30-150 nm的一种纳米级膜性囊泡。该囊泡具有自身特异性标志物，内部包裹了蛋白质、mRNA、miRNA、脂质等物质，可通过细胞之间物质和信号通讯，参与细胞生长、增殖、分化、迁移，以及血管新生和肿瘤生长等过程。

本产品是一种尺寸排阻色谱柱（SEC），适用于细胞上清外泌体的快速分离和纯化。本产品使用细胞上清浓缩剂分离富集细胞上清外泌体，再使用外泌体分离层析柱纯化浓缩液外泌体，既可以保留高纯度和高活性的外泌体，又可以高效去除蛋白质；有效地避免了超高速离心方法中超高离心力造成的外泌体膜结构损伤，同时减少了传统沉淀法中高浓度蛋白等对外泌体纯度的影响。

储存与运输

常温运输；常温保存，12个月有效。

组成

操作步骤

1 细胞上清浓缩：

1.1 将细胞上清类生物样本使用0.22 μm的滤膜过滤，初步纯化备用；

1.2 细胞上清类生物样本和细胞上清浓缩剂等体积混合，剧烈涡旋振荡15 s后，4℃冰箱静置2h；

1.3 将混合液置于离心机中，4℃、10000×g 离心60 min；丢弃上清液；

1.4 加入细胞上清类生物样本总体积5%的PBS缓冲液，充分重悬离心沉淀；

1.5 重悬液富含外泌体，可以应用于后续实验，也可以-80℃冻存备用。

2 外泌体纯化准备：

2.1 自备常温、无菌的缓冲液，如PBS（推荐G4202）；

2.2 自备常温、无菌的0.1 M NaOH、20% 乙醇；

2.3 使用分离柱前，取下分离柱红色上盖，将分离柱置于支架（推荐G6063）待用；

3 外泌体分离：

3.1 准备细胞上清浓缩剂浓缩重悬后的外泌体样本，备用；

3.2 取下分离柱白色底盖，待柱内保护液流出后，分批加入共30 mL的缓冲液清洗分离柱；

3.3 待筛板上方缓冲液全部进入分离柱后；取0.5 mL步骤3.1中备用外泌体样本加在筛板中央，（不足0.5 mL加入缓冲液补至0.5 mL）；

3.4 待全部外泌体样本经过筛板进入分离柱后，加入2.5 mL缓冲液；

3.5 待上一步全部缓冲液经过筛板进入分离柱后，加入1 mL缓冲液，与此同时收集1 mL的洗出液，该液中富含天然活性的外泌体；可以应用于后续实验，也可以-80℃冻存备用

4 分离后处理：

4.1 完成外泌体分离后，分批加入共30 mL缓冲液清洗分离柱；

4.2 如果需要继续使用分离柱分离细胞上清外泌体，重复操作步骤3.3-3.5即可；

4.3 如果不需要继续使用分离柱分离细胞上清外泌体，先加入5 mL 0.1M NaOH清洗分离柱，再分批加入共20 mL缓冲液清洗和平衡分离柱，然后加入5 mL 20% 乙醇清洗分离柱，清洗完毕时盖上分离柱白色底盖；最后加入2 mL 20% 乙醇保湿，盖上并塞紧分离柱红色上盖，分离柱常温保存。

注意事项

1. 本产品分离不同细胞上清的外泌体时，洗脱曲线和纯度略有不同，但不影响大体趋势。

2. 本产品分离细胞上清外泌体过程中应避免分离柱中液体长时间断流。

3. 本产品使用过程中，同一根柱子请勿分离不同来源的生物样本，同一根柱子请勿重复使用超过5次。

4. 本产品适宜常温保存和使用，应避免低温使用和高温加热。

5. 实验过程中请穿实验服并戴一次性手套，避免污染，确保安全。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）