产品信息

产品简介

嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素。在细胞生物学领域被广泛用作哺乳动物细胞培养系统中的筛选抗生素，用于筛选经质粒转染、转化、病毒侵染等方法获得的能表达pac基因（puro^r）的真核或原核多克隆或单克隆细胞，其特点是快速作用于细胞，一般两天可杀死99%不表达pac基因的细胞。Puromycin不仅用于稳定细胞株的筛选，也用于稳定细胞株的维持。此外，嘌呤霉素也可以用来筛选表达pac基因的大肠杆菌菌株、酵母菌株等。

本产品Puromycin solution中含10 mg/mL嘌呤霉素，20 mM HEPES，pH 6.2-6.8@25℃。经过滤除菌，可直接用于细胞培养筛选，常用工作浓度为0.5-10 μg/mL，但最佳工作浓度需要通过预实验的剂量反应曲线确定。

储存与运输

干冰运输，-20℃保存，避免反复冻融。有效期12个月。

使用说明

1. 嘌呤霉素剂量反应曲线的确定(以 shRNA 转染或者慢病毒感染为例）：

嘌呤霉素的有效筛选浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢及细胞所处细胞周期等因素相关。为了筛选到稳定表达的 shRNA 或感染病毒的细胞株，确定杀死未转染/感染细胞的最低浓度嘌呤霉素非常重要。对于初次使用的细胞，一般需要通过实验来确定适合自身实验体系的剂量反应曲线(dose-response curve or kill curve)。

(1) 第一天：24孔板中以5~8×10⁴ cells/孔的密度接种细胞，接种足够量的孔以便进行后续的剂量梯度实验。细胞培养箱内培养过夜。

(2) 第二天：更换新鲜配制的筛选培养基，该筛选培养基为含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如 0、1、2.5、5、7.5、10 μg/ml 等)，更换培养基后在细胞培养箱中继续培养。

(3) 第三天后：由于嘌呤霉素可以快速作用于细胞，一般2天内可以杀死99%的未表达pac基因的细胞，所以在加嘌呤霉素后的1-2天就可以进行观察细胞存活率，从而确定有效杀死正常细胞的药物最低浓度。如果细胞耐药性比较强，需要每日观察，一般4-10天内即可确定嘌呤霉素的最低浓度。

2. 哺乳动物稳定表达细胞株的筛选：

转染含有pac基因的质粒或者感染含有该基因的病毒后，即可筛选稳定表达株。

(1) 细胞转染或感染48 h后，将细胞置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养，此为处理组。

注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降，所以细胞的密度最好不超过 25%。建议同时做一个正常细胞的对照组。转染或感染48 h后，如果细胞过密也可以消化后重新接种细胞，培养过夜后即可进行嘌呤霉素筛选。

(2) 每隔2-3天，更换含有嘌呤霉素的培养基。

(3) 筛选7天后，对照组正常细胞应该100%死亡，处理组中存活的细胞为表达 pac 基因的细胞。然后根据实验目的进行多克隆或单克隆细胞的筛选。

注意：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要24 h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在2-10天。

(4) 待细胞可以稳定生长后，嘌呤霉素的浓度可以减半用于后续的培养。在得到稳定表达细胞株后，一般建议嘌呤霉素也须持续加入，并2-3天更换含有嘌呤霉素的新鲜培养液。

注意事项

1. 使用前请置于4℃解冻，充分解冻混匀后再使用。避免反复冻融。

2. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）