本产品适用于检测血清/血浆中微量游离血红蛋白含量。检测灵敏度及范围为800 mg/L；25-2000 mg/L。可搭配一科96孔板检测。

产品信息

产品简介

游离血红蛋白（Free hemoglobin，FHb）是指血浆中的血红蛋白。血红蛋白是由珠蛋白、原卟啉和二价铁离子（Fe²⁺）所组成的结合蛋白质，主要存在于红细胞中。当红细胞膜结构遭受破坏时，血红蛋白会游离出细胞外，故FHb可以反应溶血性贫血病人血中红细胞的破坏程度。

本产品适用于检测血清/血浆中微量游离血红蛋白含量。本产品检测原理：血红蛋白中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用，在H₂O₂、4-AAP、色原的存在下产生一种有色染料，其颜色深浅与游离血红蛋白含量成正比，因此，通过测定546 nm处的吸光度值，可以计算出FHb含量。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；Y4340-3标准品（2 g/L）需-20℃保存，其他组分2-8℃保存，6个月有效。

组成

操作步骤

1. 样本准备：血浆、血清等液体样本，直接测定。

2. 1×H₂O₂配制：使用无菌超纯水将H₂O₂（30×）稀释30倍使用，现配现用。

3. 检测工作液的配制：按照检测缓冲液：1×H₂O₂=1：1的比例，混合均匀，现配现用，注意避光。如检测10例样本，则取1 mL 1×H₂O₂加入1 mL检测缓冲液中，混匀即可。

4. 微量游离血红蛋白含量检测

(1) 标准曲线制作（可选）

① 标准品稀释：使用标准品稀释液，将标准品(2 g/L)梯度稀释成1800、1200、800、400、200、100、50 mg/L。

② 每孔加入10 μL各浓度标准品按照操作步骤反应，检测OD546，各浓度标准品OD546扣除空白后，得△OD546。以标准品浓度为横坐标x，△OD546为纵坐标y，制作标准曲线y=ax+b。

(2) 操作步骤（在酶标板中操作）

注：采用单孔标准品计算时，建议选择800 mg/L浓度标准品。

(3) 计算公式

标准孔计算：样本微量游离血红蛋白含量（mg/L）=（A_样本-A_空白）÷（A_标准-A_空白）×C_标准

注：C_标准=800 mg/L

标准曲线计算：样本微量游离血红蛋白含量（mg/L）=（A样本-A空白-b）÷a

注意事项

1. 若样本中微量游离血红蛋白浓度较高，超过线性范围时，可使用标准品稀释液稀释后再进行检测。

2. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测1800、1200、800、400、200、100、50、0 mg/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₅₄₆结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=0.0004X-0.0052，R²=0.9999。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书操作测的一例血清样本的OD₅₄₆为0.558，空白样本的OD₅₄₆为0.041，计算此样本的△OD₅₄₆为0.517。采用单孔计算时，根据800mg/L标准品的△OD₅₄₆为0.280，计算血清样本微量游离血红蛋白浓度为0.517÷0.280×800 =1477mg/L；采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₅₄₆ 0.517代入标准曲线拟合方程，计算出微量游离血红蛋白浓度为（0.517+0.0052）÷0.0004=1305.5mg/L。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）