本试剂盒可以用于检测血清、血浆等生物体液、组织、细胞以及组织或细胞培养上清等样本中的游离脂肪酸。可搭配一科96孔板使用。

产品信息

产品简介

游离脂肪酸（Non-esterified fatty acids，NEFA）是中性脂肪分解后的产物之一。当肌肉活动所需能源——肝糖耗尽时，脂肪组织会分解中性脂肪成为游离脂肪酸来充当能源使用。所以，游离脂肪酸可被认为是进行持久活动所需的物质。

反应原理为游离脂肪酸和辅酶A在乙酰辅酶A合成酶（ACS）的作用下反应生成乙酰辅酶A。乙酰辅酶A在乙酰辅酶A氧化酶（ACOD）的作用下生成H₂O₂，然后通过色原在过氧化物酶（POD）的作用下生成有色底物。在546 nm处测得的吸光度与样本中游离脂肪酸的浓度成正比。

储存与运输

干冰运输；-20℃保存，6个月有效期。

组成

操作步骤

1. 样本要求

a) 血液采集后需及时分离血清或血浆，避免溶血，可立即检测或者-20℃保存待测。

b) 组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）：体积(mL)=1：9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制成10%的匀浆液，10000 g，离心10 min，取上清测定。

c) 细胞样本：收集1×10^6以上细胞，加入100-200 μL预冷的PBS，匀浆或超声，以充分破碎细胞，4℃，10000 g，离心10 min，取上清测定。

d) 发酵液、细胞培养上清：10000 g，离心10 min，取上清可直接进行测定。

2. 游离脂肪酸含量检测

a) 试剂准备

检测前按照检测缓冲液一：酶贮存液一：底物液=20：1：2的比例配制成检测工作液一，如每个测试需要这三个组分的体积分别为200 μL，10 μL，20 μL；按照检测缓冲液二：酶贮存液二：稳定剂=10：1：1的比例配制成检测工作液二，如每个测试需要这三个组分的体积分别为50 μL，5 μL，5 μL。标准品（10 mM）可用无水乙醇稀释为1 mM。

b) 操作步骤

c) 计算公式

液体样本游离脂肪酸含量（mmol/L）=（A_样本-A_空白）÷（A_标准-A_空白）×C_标准×D

固体样本游离脂肪酸含量（mmol/gprot）=（A_样本-A_空白）÷（A_标准-A_空白）×C_标准÷Cpr×D

C_标准：标准品浓度，建议标准品（10 mM）用无水乙醇稀释至1 mM；D：样本检测前稀释倍数；Cpr：组织(细胞)匀浆蛋白浓度，gprot/L。

3. 标准曲线制备（可选）

a) 标准品稀释：取游离脂肪酸标准品（10 mM）用无水乙醇稀释成不同浓度：2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0mmol/L，进行标准曲线的制备。

b) 按照标准管操作程序进行操作，检测吸光值。

c) 绘图：以游离脂肪酸标准品浓度为横坐标X，绝对值OD（标准管减去空白管）为纵坐标Y，作标准曲线Y=aX+b。

d) 标准曲线计算样本游离脂肪酸含量：

液体样本游离脂肪酸含量（mmol/L）=（A_样本-A_空白-b）÷a×D

固体样本游离脂肪酸含量（mmol/gprot）=（A_样本-A_空白-b）÷a×D÷Cpr

D：样本检测前稀释倍数；Cpr：组织(细胞)匀浆蛋白浓度，gprot/L(prot 指蛋白)。

注意事项

1. 血清、血浆、组织块置于冰箱-20℃冷冻，可保存1个月左右；-80℃冷冻可保存2-3个月。温度越低保存时间越长。解冻后的样本或组织匀浆必须当天测定。

2. 样本浓度超过线性范围时，请用生理盐水将标本稀释，测定结果乘以稀释倍数。

3. 严重溶血及黄疸会影响测定结果。

4. 检测缓冲液一与检测缓冲液二组分在融化后建议根据实验计划作分装处理，避免多次冻融。

5. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0mmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₅₄₆结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=0.2775X+0.0052，R²=0.9998。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书操作测的一例血清样本的OD546为0.2281，空白样本的OD546为0.1092，计算此样本的△OD546为0.1189。采用单孔计算时，根据1.0 mmol/L标准品的△OD546为0.2863，计算血清样本游离脂肪酸浓度为0.1189÷0.2863×1.0 =0.4153 mmol/L；采用标准曲线计算时，将此样本的△OD546 0.1189代入标准曲线拟合方程，计算出游离脂肪酸浓度为（0.1189-0.0052）÷0.2775=0.4097 mmol/L。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）