产品信息

产品简介

一氧化氮（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。

NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生，以硝酸盐及亚硝酸盐的形式存在，通过检测其盐离子浓度可以间接测知NO浓度。本产品经过优化反应，将NO₃^¯还原为NO₂^-，NO₂^-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，所得产物在550 nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；2-8℃保存，6个月有效期。

组成

操作步骤

1. 样本、试剂准备

(1) 血液采集后需及时分离血清或血浆，避免溶血，可立即检测或者-20℃保存待测。

(2) 组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）：体积(mL)=1：9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰浴条件下机械匀浆，制成10%的匀浆液，10000g，离心10 min，取上清测定。

(3) 细胞培养液：吸取培养液，2500g，离心10 min，取上清液进行测定。

(4) 发酵液及细胞样本：细胞收集后，大约每1×10^6个细胞加300-500 μL PBS缓冲液或生理盐水进行匀浆；匀浆处理后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续检测。

(5) 检测工作液配制：还原剂、显色剂A以及显色剂B以2.5：1：1的比例进行配制，如检测10个样本，则分别取450、180、180 μL的还原剂、显色剂A以及显色剂B进行混合即可。

(6) 标准品梯度稀释：使用超纯水或双蒸水，将亚硝酸钠标准品（2 mM）稀释至200、100、50、25、12.5、6.25、0 μmol/L。

2. 检测步骤

(1) 样本脱蛋白处理

(2) 反应步骤（在离心管中操作）

(3) 含量计算

1) 标准孔计算法

血清/浆NO含量（μmol/L）=（A_样本-A_空白）÷（A_标准-A_空白）×C_标准×D

组织/发酵液/细胞NO含量（μmol/gprot）=（A_样本-A_空白）÷（A_标准-A_空白）×C_标准×D÷Cpr

注：C_标准，20 μmol/L；D：脱蛋白处理时样本稀释倍数，为4倍；Cpr：组织(细胞、发酵液)匀浆蛋白浓度，gprot/L。

2）标准曲线法：以标准品浓度梯度为横坐标x，△OD₅₅₀为纵坐标y，制作标准曲线y=ax+b。

血清/浆NO含量（μmol/L）=（A_样本-A_空白-b）÷a×D

组织/发酵液/细胞NO含量（μmol/gprot）=（A_样本-A_空白-b）÷a×D÷Cpr

注：C_标准，20 μmol/L；D：脱蛋白处理时样本稀释倍数，为4倍；Cpr：组织(细胞、发酵液)匀浆蛋白浓度，gprot/L。

注意事项

1. 脱蛋白处理时，离心后的上层液一定要澄清，若有混浊要再次离心。

2. 血清及组织块-20℃冷冻后可保存1～2个月；2～8℃保存三天。温度越低保存时间越长。

3. 如果样本检测超过线性范围时，请将样品进行适当的浓缩或稀释，并在计算公式中除以浓缩倍数或者乘以稀释倍数。

4. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测200，100，50，25，12.5，6.25，3.125，0 μmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₅₅₀结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=0.0116X-0.0238，R²=0.9989。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书操作测的一例血清样本的OD₅₅₀为0.496，空白样本的OD₅₅₀为0.188，计算此样本的△OD₅₅₀为0.308。采用单孔计算时，根据20μmol/L标准品的△OD₅₅₀为0.2504，计算血清样本一氧化氮浓度为0.308÷0.2312×20×4 =106.572μmol/L；采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₅₅₀ 0.308代入标准曲线拟合方程，计算出一氧化氮浓度为（0.308+0.0238）÷0.0116×4=114.412 μmol/L。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）