产品信息

产品简介

酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶，溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从18 kD到100 kD不等，该酶分为两类，一类为酒石酸盐敏感型，一类为氟离子敏感型。溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。

酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(pNPP底物法)检测原理是利用pNPP（para-nitrophenyl phosphate）这一常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，ACP作用于pNPP生成对硝基苯酚（p-nitrophenol，pNP），在碱性条件下pNP呈黄色，产物黄色越深说明ACP活性越高，反之则酶活性越低，通过测定400～415 nm处吸光度，就可以计算出ACP的活性水平，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；2-8℃保存，6个月有效。

组成

操作步骤

1. 样本与试剂准备

(1) 血液采集后需及时分离血清或血浆（建议肝素抗凝），避免溶血，可立即检测或者-20℃保存待测。

(2) 组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）：体积(mL)=1：9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制成10%的匀浆，10000 g，离心10 min，取上清测定。

(3) 发酵液及细胞培养液：吸取培养液，1000-1500 rpm，离心10 min，取上清液进行测定。

(4) 细胞样本：细胞收集后，大约每1×10^6个细胞加300-500 μL PBS缓冲液或生理盐水进行匀浆；匀浆处理后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续检测。

(5) 底物工作液准备：每管pNPP底物（粉末）加入5 mL检测缓冲液溶解，终浓度为2 mg/mL。也可按照检测样本数量随用随配，如测试10例样本可准备2 mL底物工作液（准确称取4 mg底物粉末加入2 mL检测缓冲液）。

2. ACP含量检测

(1) 标准曲线制作

1) 标准品稀释：使用标准品稀释液，将p-nitrophenol标准品( 1 mM )梯度稀释成200、100、50、25、12.5、6.25、0 μmol/L。

2) 每孔加入250 μL各浓度标准品，检测OD₄₀₅，各浓度标准品OD₄₀₅扣除空白后，得△OD₄₀₅。

3) 以标准品浓度为横坐标x，△OD₄₀₅为纵坐标y，制作标准曲线y=ax+b。

(2) 样本操作步骤（在离心管中操作）

注：待测样品中酸性磷酸酶活性较高时，可适当缩短孵育时间，如10 min，或者稀释样本进行检测。

(3) 酶活计算

酶活定义：pH4.8，37℃条件下，每分钟水解pNPP底物产生1 μmol p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位。

液体样本ACP活力（U/L）=（A_样本-A_样本对照-b）÷a×V1÷V2÷T

组织/细胞样本ACP活力（U/g prot）=（A_样本-A_样本对照-b）÷a×V1÷V2÷T÷Cpr

注：T：37℃反应时间，30 min；V1：反应总体积300 μL；V2：样本体积10 μL；Cpr：组织(细胞)匀浆蛋白浓度，gprot/L。

注意事项

1. 样品溶液中须避免出现酸性磷酸酶抑制剂，如酒石酸盐与氟离子。

2. 底物工作液配制后尽量当日使用完毕，按样本数量相应准备。

3. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测200，100，50，25，12.5，6.25，0μmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₄₀₅结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=0.0148X+0.0012，R²=0.9999。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书操作测的一例血清样本的OD₄₀₅为0.149，空白样本的OD₅₉₃为0.045，计算此样本的△OD₄₀₅为0.104。采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₄₀₅ 0.104代入标准曲线拟合方程，计算出酸性磷酸酶浓度为（0.104-0.0012）÷0.0148×300÷10÷30=6.946 U/L。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）