产品信息

产品简介

碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，简写为ALP、AKP或AP），又称碱性磷酸酯酶，是一组同工酶，目前已发现六种（ALP1-ALP6）。广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织，是经肝脏向胆外排出的一种酶。碱性条件下可催化磷酸酯键的水解，从而将底物分子上的磷酸基团去除，转化为羟基。此类底物包括核酸（DNA、RNA）、蛋白、生物碱等。常见的有肠道碱性磷酸酶、非组织特异性碱性磷酸酶、胎盘碱性磷酸酶等，生物学中碱性磷酸酶（ALP）水平的变化及其活性的高低常被作为一种检测组织行为的指标。

本试剂盒适用于检测细胞或组织裂解液/匀浆液、血清、血浆、尿液、纯化酶等中碱性磷酸酶的含量。本产品检测原理：对硝基苯磷酸（p-nitrophenyl phosphate, pNPP）是一种常用的磷酸酶显色底物，碱性条件下，被ALP水解为黄色的对硝基苯酚（p-nitrophenol, pNP），可以在400-415 nm检测吸光度。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；2-8℃保存，6个月有效。

组成

操作步骤

1. 样本要求

(1) 血液采集后需及时分离血清或血浆（建议肝素抗凝），避免溶血，可立即检测或者-20℃保存待测。

(2) 组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）：体积(mL)=1：9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制成10%的匀浆，10000g，离心10 min，取上清测定。

(3) 发酵液及细胞培养液：吸取培养液，2500g离心10 min，取上清液进行测定。

(4) 细胞样本：细胞收集后，大约每1×10^6个细胞加300-500 μL PBS缓冲液或生理盐水进行匀浆；匀浆处理后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续检测。

2. ALP含量检测

(1) 标准曲线制作

1) 标准品稀释：使用标准品稀释液，将p-nitrophenol标准品( 1 mM )梯度稀释成200、100、50、25、12.5、6.25、0 μmol/L。

2) 每孔加入250 μL各浓度标准品，检测OD405，各浓度标准品OD405扣除空白后，得△OD405。

3) 以标准品浓度为横坐标x，△OD405为纵坐标y，制作标准曲线y=ax+b。

(2) 样本操作步骤

注：a. 待测样品中碱性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至20-30 min；待测样品中碱性磷酸酶活性较高时，可适当缩短孵育时间，如5 min，或者稀释样本进行检测。

(3) 酶活计算

酶活定义：37℃条件下，每分钟水解para-nitrophenyl phosphate显色底物产生1 μmol p-nitrophenol所需的碱性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位

液体样本ALP活力（U/L）=（A_样本-A_样本对照-b）÷a×V1÷V2÷T

组织/细胞样本ALP活力（U/g prot）=（A_样本-A_样本对照-b）÷a×V1÷V2÷T÷Cpr

注：T：37℃反应时间，10 min；V1：反应总体积，250 μL；V2：样本体积，5 μL；Cpr：组织(细胞)匀浆蛋白浓度，gprot/L。

注意事项

1. 样品溶液中须避免出现EDTA、氟离子、柠檬酸盐等碱性磷酸酶抑制剂。

2. 如果浓度较高，超过线性范围时，可使用PBS稀释后再进行检测。

3. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测200，100，50，25，12.5，6.25，0μmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₄₀₅结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=0.0132X+0.0052，R²=1。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书操作测的一例血清样本的OD₄₀₅为0.123，空白样本的OD₄₀₅为0.048，计算此样本的△OD₄₀₅为0.075。采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₄₀₅ 0.075代入标准曲线拟合方程，计算出碱性磷酸酶浓度为（0.075-0.0052）÷0.0132×250÷5÷10=26.439U/L。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）