产品信息

产品简介

糖原（Glycogen）是由葡萄糖单位构成的高分子多糖，是糖的主要的储存形式之一，主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量，分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度，当血糖升高时可在肝脏合成糖原，血糖降低时，肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此，肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式，在剧烈运动消耗大量血糖时，肌糖原不能直接分解成血糖，必须先分解产生乳酸，随血液循环到肝脏，通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。

糖原在浓硫酸的作用下可脱水生成糖醛衍生物，后者再与蒽酮作用形成蓝色化合物，与同法处理的标准葡萄糖溶液比色定量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前先将组织放入浓碱中加热以破坏其它成分而保留糖原。

储存与运输

冰袋(wet ice)运输；2~8℃保存，6个月有效。

试剂盒组成

操作步骤

1. 样品、试剂准备：

1.1. 组织样本处理：准确称取组织（肝脏或肌肉）重量（20~50 mg），按重量（g）：体积（mL）=1：3的比例，加入3倍体积的碱溶液，沸水浴30 min，水浴后加入16倍体积的纯水稀释为5%组织水解液。例如：称取30 mg组织，加入90 μL碱溶液，沸水浴后加入480 μL纯水。肝脏5%水解液在测试前以纯水稀释10倍为0.5%水解液，混匀待测；肌肉5%水解液不作稀释，混匀待测。

1.2. 发酵液及细胞样本：收集1×10^6以上细胞（贴壁细胞使用细胞刮收集），向细胞沉淀中加入0.2 mL碱溶液，沸水浴30 min，静置待测。

1.3. 检测工作液配制：每管显色剂粉末加入12.5 mL浓硫酸（自备）溶解，浓度为2 mg/mL。也可少量配制，例如：称量10.8 mg的显色剂粉末，加入5.4 mL浓硫酸。

1.4. 标准品稀释：将1 mg/mL标准品，使用双蒸水稀释为0.1 mg/mL（标准孔计算法）；将1 mg/mL标准品，使用双蒸水稀释为0.005，0.01，0.02，0.04，0.08，0.1，0.2 mg/mL（标准曲线计算法）。

2. 糖原浓度检测：

2.1. 按照下表，在离心管中操作

2.2. 浓度计算：

2.2.1. 标准孔计算：

组织样本糖原含量（mg/g）=（A_样本-A_空白）÷（A_标准-A_空白）×C_标准×f÷0.05÷1.11

发酵液及细胞样本糖原含量（mg）=（A_样本-A_空白）÷（A_标准-A_空白）×C_标准÷1.11×V_样本

2.2.2. 标准曲线计算：以标准品浓度为横坐标X，吸光度绝对值OD（标准孔减去空白孔）为纵坐标Y，作标准曲线Y=aX+b。组织样本糖原含量（mg/g）=（A_样本-A_空白-b）÷a×f÷0.05÷1.11

发酵液及细胞样本糖原含量（mg）=(A_样本-A_空白-b）÷a÷1.11×V_样本

注：f为测试前组织样本的稀释倍数，肝脏为10，肌肉为1；1.11为糖原含量与葡萄糖含量的转化系数；0.05为5%组织水解样本的浓度0.05 g/mL；C_标准：0.1 mg/mL；V_样本：0.2 mL。

注意事项

1. 注意先加完样本后再加检测工作液，因检测工作液中含有浓硫酸，避免试剂溅出造成危险后果。

2. 显色剂粉末在用浓硫酸溶解后请尽快使用，检测前现配现用。

3. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测0.005，0.01，0.02，0.04，0.08，0.1，0.2 mg/mL梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₆₂₀结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=7.8147X+0.0127，R²=0.9955。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书操作测的一例肝脏组织样本的OD₆₂₀为0.5685，空白样本的OD₆₂₀为0.177，计算此样本的△OD₆₂₀为0.3915。采用单孔计算时，根据0.1 mg/mL标准品的△OD₆₂₀为0.847，计算肝脏组织样本糖原浓度为0.3915÷0.847×0.1×10÷0.05÷1.11=8.328mg/g；采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₆₂₀ 0.3915代入标准曲线拟合方程，计算出糖原浓度为（0.3915-0.0127）÷7.8147×10÷0.05÷1.11=8.734mg/g。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）