总抗氧化能力T-AOC检测试剂盒（ABTS法）
- 96 T
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
总抗氧化能力T-AOC检测试剂盒（ABTS法） | Y4324-96T | 96T |
产品简介
在细胞和组织的正常生理代谢过程以及一些环境因子诱导例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等都会产生活性氧。活性氧产生后，可以导致细胞内脂、蛋白和 DNA 等的氧化损伤，诱发氧化应激(Oxidative stress)，继而导致一系列疾病。机体中存在多种抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除体内产生的各种活性氧，以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。
ABTS法是使用最广泛的间接检测方法，可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定。ABTS经氧化后生成稳定的绿色阳离子自由基 ABTS+，能溶于水相或酸性乙醇介质中，在405/734 nm处有最大吸收。被测物质加入ABTS+溶液后，所含抗氧化成分能与ABTS+发生反应而使反应体系褪色，在405 nm读取吸光度的变化，并以Trolox作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
储存与运输
冰袋(wet ice)运输；-20℃避光保存，12个月有效。
试剂盒组成
Component Number | Component | Y4324-96T |
Y4324-1 | 检测缓冲液 | 20 mL |
Y4324-2 | ABTS溶液 | 1 mL |
Y4324-3 | 双氧水溶液（40×） | 0.5 mL |
Y4324-4 | 过氧化物酶溶液（10×） | 0.2 mL |
Y4324-5 | 10 mmol/L Trolox标准品 | 0.2 mL |
说明书 | 1份 | |
操作步骤
1. 样品、试剂准备：
1.1. 血清/浆：血液样本采集后需及时分离血清或血浆，避免溶血。血浆建议肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜采用EDTA。
1.2. 尿液、发酵液、细胞上清等液体样本：若澄清，直接检测；若浑浊，4℃，12000 rpm，离心5 min，取上清检测；若是油性样本，可用 80%乙醇溶解后再取上清检测。
1.3. 组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）：体积（mL）=1：9的比例，加入9倍体积的预冷PBS（或生理盐水，水溶性样本）或80%乙醇（非水溶性样本），冰浴条件下机械匀浆，以充分破碎细胞，并释放其中的抗氧化物，4℃，12000 rpm，离心5-10 min，取上清测定（留取部分样本进行蛋白浓度测定，Y2012或Y2037）。
1.4. 发酵液及细胞样本：收集1×10^6以上细胞（贴壁细胞使用细胞刮收集），加入200 μL预冷的PBS（或生理盐水，水溶性样本）或80%乙醇（非水溶性样本），匀浆或超声，以充分破碎细胞并释放抗氧化物，4℃，12000 rpm，离心5-10 min，取上清测定（留取部分样本进行蛋白浓度测定，Y2012或Y2037）。
1.5. 双氧水应用液配制：使用双蒸水稀释双氧水溶液（40×）至1×，现配现用。
1.6. ABTS工作液配制：按照检测缓冲液152 μL+ABTS溶液10 μL+双氧水应用液8 μL的比例进行配制。如检测10个样本，则取100 μL ABTS溶液和80 μL 双氧水应用液，加入1520 μL的检测缓冲液中，混匀。
1.7. 过氧化物酶工作液配制：使用检测缓冲液稀释过氧化物酶溶液（10×）至1×，现配现用。
1.8. 标准品稀释：取10 mmol/L Trolox标准品，使用双蒸水稀释为1.0、0.8 、0.4 、0.2 、0.1 mmol/L，按照操作表，制作标准曲线。
2. 总抗氧化能力检测：
2.1. 按照下表，进行操作
空白 | 标准 | 样本 | 样本对照 | |
蒸馏水 | 10 μL | 190 μL | ||
标准品 | 10 μL | |||
样本 | 10 μL | 10 μL | ||
过氧化物酶工作液 | 20 μL | 20 μL | 20 μL | |
ABTS工作液 | 170 μL | 170 μL | 170 μL | |
室温孵育6分钟，检测405 nm处吸光值。 | ||||
2.2. 计算：用从标准曲线上获得的抗氧化剂 Trolox 的量来表示样本的总抗氧化能力。
2.2.1. 绘制标准曲线：以Trolox标准品浓度为横坐标X，吸光度值OD为纵坐标Y，作标准曲线Y=aX+b。
2.2.2. 液体样本的计算：
T-AOC（mmol/L）=（A测定-A样本对照-b）÷a×D
2.2.3 组织/发酵液/细胞样本的计算：
T-AOC（mmol/g）=（A测定-A样本对照-b）÷a÷Cpr×D
注：Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；D：样本稀释倍数。
注意事项
1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2. 样本中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。
3. 如果样本不能及时检测，建议-80℃冻存，一个月内有效。
4. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。
附录1：技术参数
检测指标 | 总抗氧化能力 | 回收率 | 100±5% |
样品类型 | 血清/浆、组织、发酵液、细胞、尿液、唾液等 | 批内YV | <3% |
检测灵敏度及范围 | 0.05 mmol/L；0.05-1 mmol/L | 批间YV | <5% |
附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）
根据说明书信息检测0、0.1，0.2，0.4，0.8，1.0mmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：
浓度（mmol/L) | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 0.8 | 1.0 |
OD405 | 1.452 | 1.386 | 1.310 | 1.163 | 0.922 | 0.803 |
以样本浓度为横坐标，OD405结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为y = -0.6498x + 1.4434，R2=0.9981。
附录3：样本检测示例（数据仅供参考）
按照说明书操作测的一例血清样本的OD405为0.9512，采用标准曲线计算时，将此样本的OD405为0.9512代入标准曲线拟合方程，计算出总抗氧化剂T-AOC（ABTS法）浓度为（0.9512-1.4434）÷（-0.6498）=0.76mmol/L。
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
（产品包装升级中，以实物为准。）
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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