产品信息

产品简介

细胞和组织，在正常生理代谢过程中以及一些环境因子诱导例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等都会产生活性氧。活性氧产生后，可以导致细胞内脂、蛋白和DNA等的氧化损伤，诱发氧化应激(Oxidative stress)，继而导致一系列疾病。机体中存在多种抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除体内产生的各种活性氧，以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。

FRAP法原理为：在酸性环境下，抗氧化物可以还原Fe³⁺-三吡啶三吖嗪(Fe³⁺-TPTZ)产生蓝色的Fe²⁺-TPTZ，在590 nm读取吸光度即可计算出样品中的总抗氧化能力。常用于血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测。

储存与运输

冰袋(wet ice)运输；-20℃避光保存，12个月有效。

试剂盒组成

操作步骤

1. 样品、试剂准备：

1.1. 血清/浆：血液样本采集后需及时分离血清或血浆，避免溶血。血浆建议肝素或柠檬酸钠抗凝，不可采用EDTA。

1.2. 尿液、发酵液、细胞上清等液体样本：若澄清，直接检测；若浑浊，4℃，12000 rpm，离心5-10 min，取上清检测。

1.3. 组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）：体积（mL）=1：9的比例，加入9倍体积的生理盐水或者PBS，冰浴条件下机械匀浆，以充分破碎细胞，并释放其中的抗氧化物，4℃，12000 rpm，离心5-10 min，取上清测定（留取部分样本进行蛋白浓度测定，Y2012或Y2037）。

1.4. 发酵液/细胞样本：收集1×10^6以上细胞（贴壁细胞使用细胞刮收集），加入200 μL预冷的PBS，匀浆或超声，以充分破碎细胞并释放抗氧化物，4℃，12000 rpm，离心5-10 min，取上清测定（留取部分样本进行蛋白浓度测定，Y2012或Y2037）。

1.5. 检测工作液配制：按照检测缓冲液：TPTZ溶液：底物液=150：15：15的比例进行配制，如检测10个样本，则取150 µL TPTZ溶液，150 µL 底物液，加入1.5 mL检测缓冲液，得到10份检测工作液。

1.6. 标准品稀释：取10 mmol/L Trolox标准品，使用双蒸水稀释为1、0.8、0.4、0.2、0.1、0 mmol/L，按照操作表，制作标准曲线。

2. 总抗氧化能力检测：

2.1. 按照下表，进行操作

2.2. 计算：用从标准曲线上获得的抗氧化剂 Trolox 的量来表示样本的总抗氧化能力。

2.2.1. 绘制标准曲线：以Trolox标准品浓度为横坐标X，吸光度绝对值OD（标准孔减去空白孔）为纵坐标Y，作标准曲线Y=aX+b。

2.2.2. 液体样本的计算：

T-AOC（mmol/L）=（A_测定-A_空白-b）÷a×D

2.2.3 组织/发酵液/细胞样本的计算：

T-AOC（mmol/g prot）=（A_测定-A_空白-b）÷a÷Cpr×D

注：Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；D：样本稀释倍数。

注意事项

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

2. 在酸性条件下呈蓝色或者接近蓝色的试剂，会对检测产生干扰，需尽量避免，或者设置样本对照。

3. 如果样本中含有较高浓度的铁盐或亚铁盐，会干扰测定，不宜使用本测试方法。另，血液样本中铁离子或亚铁离子总浓度不超过10 μmol/L，所以不会影响检测。

4. 样本中不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢剂和DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。

5. 如果样本不能及时检测，建议-80℃冻存，一个月内有效。

6. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测0、0.1，0.2，0.4，0.8，1.0mmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₅₉₃结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=0.6059X+0.0014，R²=1。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书操作测的一例血清样本的OD₅₉₃为0.260，空白样本的OD₆₂₀为0.055，计算此样本的△OD₅₉₃为0.205。采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₅₉₃ 0.205代入标准曲线拟合方程，计算出总抗氧化能力T-AOC（FRAP法）浓度为（0.205-0.0014）÷0.6059=0.336mmol/L。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）