产品信息

产品简介

乳酸是糖无氧氧化(糖酵解)的代谢产物。乳酸产生于骨胳，肌肉，脑和红细胞。经肝脏代谢后由肾分泌排泄。血乳酸测定可反映组织氧供和代谢状态以及灌注量不足。乳酸水平的增高可见于多种临床疾病。

本试剂盒适用于检测血清、组织、发酵液、细胞、培养液等中乳酸(LD)的含量。本产品检测原理：L-乳酸被特定的乳酸氧化酶(LOD)氧化为丙酮酸和H₂O₂，在过氧化物酶(POD)、色原存在的情况下产生一种有色染料，在546 nm处分光光度测定。光度法测得的染料吸光度与L-乳酸浓度成正比。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；2-8℃保存，6个月有效期。

组成

操作步骤

1. 样本要求

a) 血液采集后需及时分离血清或血浆，避免溶血，可立即检测或者-20℃保存待测。

b) 组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）：体积(mL)=1：9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制成10%的匀浆液，10000 g，离心10 min，取上清测定。

c) 发酵液及细胞样本：收集1×10^6以上细胞，加入100-200 μL预冷的PBS，匀浆或超声，以充分破碎细胞并释放抗氧化物，4℃，10000 g，离心5-10 min，取上清测定。

d) 细胞培养上清：2500 rpm离心10 min，取上清可直接进行测定。

2. 乳酸含量检测

a) 操作步骤

b) 计算公式

液体样本乳酸含量（mmol/L）=（A_样本-A_空白）/（A_标准-A_空白）×C_标准×D

固体样本乳酸含量（mmol/L/gprot）=（A_样本-A_空白）/（A_标准-A_空白）×C_校准/Cpr×D

C_标准：标准品浓度，乳酸标准品（20 mmol/L）用蒸馏水稀释至5 mmol/L；D：样本检测前稀释倍数；Cpr：组织(发酵液、细胞)匀浆蛋白浓度，gprot/L。

3. 标准曲线制备（可选）

a) 标准品稀释：取乳酸标准品（20 mmol/L）用蒸馏水稀释成不同浓度：10、5、2.5、1.25、0.625、0 mmol/L，进行标准曲线的制备。

b) 按照标准管操作程序进行操作，检测吸光值。

c) 绘图：以L-乳酸标准品浓度为横坐标X，绝对值OD（标准管减去空白管）为纵坐标Y，作标准曲线Y=aX+b。

d) 标准曲线计算样本乳酸含量：

液体样本乳酸含量（mmol/L）=（A_样本-A_空白-b）/a×D

固体样本乳酸含量（mmol/L/gprot）=（A_样本-A_空白-b）/a×D/Cpr

D：样本检测前稀释倍数；Cpr：组织(发酵液、细胞)匀浆蛋白浓度，gprot/L(prot 指蛋白)。

注意事项

1. 血清、血浆、组织块置于冰箱-20℃冷冻，可保存1个月左右；-80℃冷冻可保存2-3个月。温度越低保存时间越长。解冻后的样本或组织匀浆必须当天测定。

2. 严重溶血及黄疸会使得测定结果偏高。

3. 若乳酸浓度较高，超过线性范围时，可使用超纯水稀释后再进行检测。

4. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测10、5、2.5、1.25、0.625、0 mmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₅₄₆结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=0.201X+0.0058，R²=9999。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书操作测的一例血清样本的OD₅₄₆为0.938，空白样本的OD₅₄₆为0.074，计算此样本的△OD₅₄₆为0.864。采用单孔计算时，根据5mmol/L标准品的△OD₅₄₆为1.02，计算血清样本L-乳酸浓度为0.864÷1.02×5=4.235mmol/L；采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₅₄₆0.864代入标准曲线拟合方程，计算出血清样本L-乳酸浓度为（0.864-0.0058）÷0.201=4.269mmol/L。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）