产品信息

产品简介

铁是生物体内重要的金属元素之一，参与造血、氧气运输、增强免疫、某些酶合成与反应活性等多种生理活动。随着近些年铁死亡概念的提出，铁离子含量变化作为铁死亡的特性之一，也表明铁离子代谢过程与生物体的健康与疾病有着重要的关系。

本产品为总铁离子检测试剂盒（Total Iron Assay Kit），检测原理为样品在特殊条件下，铁离子被充分释放，并迅速被试剂中还原剂还原成亚铁离子。随后亚铁离子和检测探针结合，生成有色物质，并在一定浓度范围内，生成物质的颜色深浅和铁离子浓度成正比。

储存与运输

冰袋(wet ice)运输；2-8℃避光保存，6个月有效。

组成

注意：总铁检测缓冲液和提取液使用前需室温平衡30 min。

操作步骤

1. 样品准备：

1.1. 血浆、血清样品：以样品和提取液1：4比例充分混合，用于后续总铁离子检测；

1.2. 组织样品：请使用提取液进行匀浆裂解，其中组织和提取液的比例为1：9即可（例如，30 mg：270 μL）；常温匀浆裂解后，4℃，10000 g离心10-15 min，取上清用于后续总铁离子的检测；

1.3. 细胞或发酵液样品：细胞收集后，使用提取液重悬细胞，大约每1×10⁶个细胞加300 μL提取液；常温匀浆裂解后，4℃，10000 g离心10-15 min，取上清用于后续总铁离子检测；

1.4. 铁离子标准品：使用超纯水将铁离子标准品（1 mmol/L）梯度稀释，例如取其50 μL加入到950 μL超纯水中，稀释为50 μmol/L，并进一步梯度稀释做标准曲线，即50/25/12.5/6.25/3.125 μmol/L，与待测样品进行后续检测后，用于标准曲线法数据分析；或适当地稀释成25 μmol/L的标准品，与待测样品进行后续检测后，用于标准品换算法数据分析；

2. 样本检测（在离心管中操作）：

3. 数据分析：

3.1. 标准孔计算法：

血清/浆总铁离子含量（μmol/L）=（A_样本-A_空白）÷（A_标准-A_空白）×C_标准×f

组织/细胞总铁离子含量（μmol/g prot）=（A_样本-A_空白）÷（A_标准-A_空白）×C_标准÷Cpr

注：C_标准，25 μmol/L；Cpr：组织(细胞)匀浆蛋白浓度，g prot/L；f：样本稀释倍数为5。

3.2. 标准曲线法：以标准品浓度梯度为横坐标x，△OD593为纵坐标y，制作标准曲线y=ax+b。

血清/浆总铁离子含量（μmol/L）=（A_样本-A_空白-b）÷a×f

组织/细胞总铁离子含量（μmol/g prot）=（A_样本-A_空白-b）÷a÷Cpr

注：Cpr：组织(细胞)匀浆后蛋白浓度，g prot/L；f：样本稀释倍数为5。

注意事项

1. 使用前轻轻晃动各类试剂，确保各成分均匀条件下使用。

2. 标准品换算法分析数据时，需待测样品和标准品浓度处于试剂盒线性检测量程内；标准曲线法分析数据时，确保标准曲线R²＞0.99。

3. 避免使用铁制物品处理或转移样品。

4. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测50、25、12.5、6.25、3.125、0 μmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₅₉₃结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=0.0039X+0.001，R²=0.9999。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书操作测的一例血清样本的OD₅₉₃为0.074，空白样本的OD₅₉₃为0.047，计算此样本的△OD₅₉₃为0.027。采用单孔计算时，根据25 μmol/L标准品的△OD₅₉₃为0.1，计算血清样本总铁离子浓度为0.027÷0.1×25×5 =33.750 μmol/L；采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₅₉₃ 0.027代入标准曲线拟合方程，计算出总铁离子浓度为（0.027-0.001）÷0.0039×5=33.335μmol/L。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）