产品信息

产品简介

谷胱甘肽（谷氨酰-半胱氨酰-甘氨酸）是一种由3个氨基酸残基组成的小肽，广泛存在于机体中。谷胱甘肽以还原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）两种不同的形式存在，并且可以在一定条件下互相转换。GSH是动物细胞中重要的抗氧化剂，且是绝大多数细胞巯基的主要来源。在生理条件下，由于GSSG会被谷胱甘肽还原酶酶促还原，因此，GSH是机体内主要存在形式。

本试剂盒利用谷胱甘肽还原酶将GSSG还原成GSH，再通过GSH与DTNB反应，生成TNB和GSSG的原理。其中产生的TNB与总谷胱甘肽呈现正相关性，因此，可通过测定TNB产生量来评估总谷胱甘肽（T-GSH）的量。GSSG在谷胱甘肽还原酶的作用下再次转换生成GSH，然后继续和DTNB反应的循环体系作用下，也大大加强了检测灵敏性。

储存与运输

冰袋运输；-20℃避光保存，6个月有效。

组成

操作步骤

1. 前处理和准备工作：

1.1. 样品前处理

1.1.1. 血浆、血清样品：1：1的比例加入蛋白去除试剂，充分混匀；4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续总谷胱甘肽检测；

1.1.2. 组织样品：添加蛋白去除试剂到组织中进行匀浆裂解（重量mg：体积μL为1：9，例如：20 mg比180 μL）；匀浆裂解后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续总谷胱甘肽检测；

1.1.3. 细胞样品：细胞收集后，使用蛋白去除试剂重悬细胞，大约每1 X 10^7个细胞加100-200 μL 试剂，对其进行超声或冰上裂解 10-20 min；处理后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续总谷胱甘肽检测；

1.2. 标准品配置和准备：

1.2.1. 谷胱甘肽标准品（GSH粉末）在低速离心机上离心，确保粉末都在管底；使用500 μL无菌超纯水溶解，配制成谷胱甘肽标准品（GSH，1 mmol/L），建议分装后-20℃保存，1个月内用完；

1.2.2. 蛋白去除试剂和超纯水1：9的比例进行混合，并用其对谷胱甘肽标准品（1 mmol/L）进行梯度稀释（例如取其50 μL标准品加入上述950 μL混合液中，稀释为50 μmol/L，并进一步梯度稀释做标准曲线，即50/25/12.5/6.25/3.125 μmol/L），与待测样品进行后续检测后，用于标准曲线法数据分析。

2. 总谷胱甘肽检测：

2.1. 将谷胱甘肽还原酶和总谷胱甘肽检测缓冲液1：9混合，配置成谷胱甘肽检测工作液；

2.2. 将检测探针和超纯水1：19混合配置成检测探针工作液；

2.3. 参考下表进行总谷胱甘肽检测；

3. 数据分析：

3.1. 标准曲线法：

3.1.1. 根据梯度稀释的标准组值-空白组值数据使用Excel等软件绘制标准曲线：Y=a X+ b；

3.1.2. 样品总谷胱甘肽含量计算：

Y为标准组值-空白组值；X为谷胱甘肽含量；a为标准曲线斜率；b为标准曲线截距；ΔA为：样品组值-空白组值；2^*为血清和蛋白去除试剂混合后稀释的倍数；V为匀浆裂解组织或细胞使用的蛋白去除试剂的体积（L）；m为组织湿重（kg）；n为细胞量（10⁶个）；f为稀释倍数。

注意事项

1. 使用前充分溶解并轻轻晃动各类试剂，确保各成分均匀条件下使用。

2. 不同样品含量不同，请根据实际情况，适当提高或降低样品浓度。

3. 初次使用可视情况适当分装储存，以避免反复冻融影响试剂性能。

4. 谷胱甘肽检测工作液和检测探针工作液现配现用。

5. 标准曲线法分析数据时，确保标准曲线R²＞0.99。

6. 还原剂以及巯基活性化合物会严重干扰本试剂盒的测定。

7. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测吸光度法50、25、12.5、6.25、3.125、0 μmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₄₁₂结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=0.0115X+0.0046，R²=0.9997。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书吸光度法操作测的一例血清样本的OD₄₁₂为0.384，空白样本的OD₄₁₂为0.139，计算此样本的△OD₄₁₂为0.245。采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₄₁₂ 0.245代入标准曲线拟合方程，计算出总谷胱甘肽含量为（0.245-0.0046）÷0.0115×2=41.808 μmol/L。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）