产品信息

产品简介

谷胱甘肽（谷氨酰-半胱氨酰-甘氨酸）是一种由3个氨基酸残基组成的小肽，广泛存在于机体中。谷胱甘肽以还原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）两种不同的形式存在，并且可以在一定条件下互相转换。GSH是动物细胞中重要的抗氧化剂，且是绝大多数细胞巯基的主要来源。在生理条件下，由于GSSG会被谷胱甘肽还原酶酶促还原，因此，GSH是机体内主要存在形式。

本试剂盒根据还原型谷胱甘肽可与DTNB反应产生TNB和GSSG的原理，TNB是一种黄色产物，通过测量其在412 nm的吸光度，就能有效确定样品GSH含量。

储存与运输

冰袋运输；-20℃避光保存，6个月有效。

组成

操作步骤

1. 样品准备：

1.1. 样品前处理

1.1.1. 血浆、血清样本：将样品与蛋白去除试剂1:4（例如50 μL血清：200 μL蛋白去除试剂）充分混匀；4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续还原型谷胱甘肽检测；

1.1.2. 组织样本：使用合适的缓冲液（PBS、生理盐水等）进行匀浆裂解，其中组织和生理盐水的比例为1比9（0.1g：0.9mL）即可；匀浆裂解后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清与蛋白去除试剂1:1，充分混匀；4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续还原型谷胱甘肽检测；

1.1.3. 细胞样品：细胞收集后，可使用合适的缓冲液重悬细胞，大约每大约每1 X 10⁶个细胞加300-500 μL PBS或生理盐水；匀浆处理后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清与蛋白去除试剂1:1，充分混匀；4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续还原型谷胱甘肽检测；

1.2. 标准品配置和准备：

1.2.1. 谷胱甘肽标准品（GSH粉末）在低速离心机上离心，确保粉末都在管底；使用500 μL无菌超纯水溶解，配制成还原型谷胱甘肽标准品（1 mmol/L），建议分装后-20℃保存，1个月内用完；

1.2.2. 使用超纯水对还原型谷胱甘肽标准品（1 mmol/L）进行梯度稀释（例如取其50 μL标准品加入950 μL超纯水中，稀释为50 μmol/L，并进一步梯度稀释做标准曲线，即50/25/12.5/6.25/3.125 μmol/L），与待测样品进行后续检测后，用于标准曲线法数据分析。

2. 还原型谷胱甘肽检测：

2.1. 将检测探针和超纯水1：19混合配置成检测探针工作液（建议现配现用）；

2.2. 参考下表进行还原型谷胱甘肽检测；

3. 数据分析：

3.1. 标准曲线法：

3.1.1. 根据梯度稀释的标准组值-空白组值数据使用Excel等软件绘制标准曲线：Y=a X+ b；

3.1.2. 样品还原型谷胱甘肽含量计算：

单位血清样品GSH含量(μmol/L)=(∆A-b)÷a×5*×f

单位组织样品GSH含量(μmol/gprot)=(∆A-b)÷a×2*×f÷蛋白浓度

单位细胞样品GSH含量(μmol/gprot)=(∆A-b)÷a×2*×f÷蛋白浓度

Y为标准组值-空白组值；X为还原型谷胱甘肽含量；a为标准曲线斜率；b为标准曲线截距；ΔA为：样品组值-空白组值；5^*与2^*为样本和蛋白去除试剂混合后稀释的倍数；；f为稀释倍数。

3.2. 标准品换算法：

单位血清GSH含量(μmol/L)=∆A÷∆A1×C_标准管×5*

单位组织GSH含量(μmol/gprot)=∆A÷ΔA1×C_标准管×2*÷蛋白浓度

单位细胞样品GSH含量(μmol/gprot)=∆A÷∆A1×C_标准管×2*÷蛋白浓度

ΔA为：样品组吸光值-空白组吸光值；ΔA1为：标准管吸光值-空白组吸光值；C_标准管：标准管浓度（300μmol/L）；5^*与2^*为样本和蛋白去除试剂混合后稀释的倍数。

注意事项

1. 使用前充分溶解并轻轻晃动各类试剂，确保各成分均匀条件下使用。

2. 初次使用可视情况适当分装储存，以避免反复冻融影响试剂性能。

3. 蛋白去除试剂会影响样本的BCA检测，请在添加该成分之前对匀浆后样品进行BCA检测。

4. 标准品换算法分析数据时，需待测样品和标准品浓度处于试剂盒线性检测量程内；标准曲线法分析数据时，确保标准曲线R²＞0.99。

5. 还原剂以及巯基活性化合物会严重干扰本试剂盒的测定。

6. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测50、25、12.5、6.25、3.125、0μmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₄₁₂结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=0.0046X+0.0036，R²=9994。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书操作测的一例稀释血清样本OD₄₁₂为0.124，空白样本的OD₄₁₂为0.059，计算此样本的△OD₄₁₂为0.065。采用单孔计算时，根据300μmol/L标准品的△OD₄₁₂为1.401，计算血清样本还原型谷胱甘肽浓度为0.065÷1.401×300×5 =69.44μmol/L；采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₄₁₂0.065代入标准曲线拟合方程，计算出血清样本还原型谷胱甘肽浓度为（0.065-0.0036）÷0.0046×5 =66.74μmol/L。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）