产品信息

产品简介

自由基是人体生命活动中各种生化反应的中间代谢产物，能够攻击生物膜中多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化。在脂质过氧化过程中会形成脂质过氧化物，其中丙二醛（MDA）是生物体过氧化产物中常见的一类。因此MDA水平常被用作评判细胞或组织中脂质过氧化水平，应用于氧化应激、铁死亡等研究领域。

本试剂盒利用MDA在高温环境下可与硫代巴比妥酸（TBA）反应形成一种棕红色复合物，并可以通过吸光度或荧光强度检测的原理，经过本司研发团队的优化和调试，可有效对细胞内MDA进行定量检测。且本试剂盒中提供抗氧化剂，可以避免样品在检测的过程中发生额外氧化，使检测结果更加准确。

储存与运输

冰袋(wet ice)运输；抗氧化试剂-20℃避光保存；其他组分2-8℃避光保存，6个月有效。

组成

操作步骤

1. 细胞样品准备：细胞收集后，可使用PBS或IP裂解液重悬细胞，大约每1×10^7个细胞加100-200 μL 试剂，对其进行超声或冰上裂解；处理后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续MDA检测；

2. 检测准备工作：

2.1. MDA探针工作液配制：在MDA检测探针瓶中加入5 mL超纯水，在煮沸条件充分溶解；趁热加入与超纯水等体积的5 mL冰醋酸（自备）混匀，配制成MDA探针工作液（4℃可保存一个月）；

2.2. MDA检测工作液配制：根据所测样品数（含标准品），参考下表合理配制；

2.3. MDA标准品配制：根据需要，使用PBS或超纯水将MDA标准品（200 μM）梯度稀释（例如吸光度法可设置50/25/12.5/6.25/3.125 μmol/L；荧光强度法可设置10/8/6/4/2 μmol/L），与待测样品进行后续检测后，用于标准曲线法数据分析；或适当地稀释成一个已知浓度的标准品（如50 μmol/L），与待测样品进行后续检测后，用于标准品换算法数据分析；

3. MDA检测：

3.1. 根据下表将样品和MDA检测工作液充分混合；

3.2. 在95℃条件下，孵育40 min；

3.3. 孵育结束后，立即冰浴5 min；

3.4. 冰浴结束后，10000 g 离心10 min，取200 μL上清于透明96孔板中，使用酶标仪检测532 nm处吸光度；或取200 μL于黑色96孔板中，使用酶标仪检测荧光强度（Ex 525/Em 553）；建议优先吸光度法进行检测，当样品浓度过低，例如：1 μmol/L以下，可使用荧光强度法进行检测。

4. 数据分析：

数据分析前，需计算待测细胞样品蛋白浓度。可通过BCA蛋白定量检测试剂盒（Y2037）对待测样品进行蛋白浓度检测。

4.1. 标准曲线法：

4.1.1. 根据梯度稀释的标准组值-空白组值数据绘制标准曲线：Y=a X+ b(Y为标准组值-空白组值；X为标准品MDA浓度；a为标准曲线斜率；b为标准曲线截距)；

4.1.2. 细胞样品MDA浓度计算：

单位样品MDA（μmol/gprot）=[（样品组值-空白组值）-b]÷a×样品稀释倍数÷样品蛋白浓度（gprot/L）

4.2. 标准品换算法，细胞样品MDA浓度计算：

单位样品MDA（μmol/gprot）=（样品组值-空白组值）÷（标准组值-空白组值）×MDA标准品浓度（μmol/L）×样品稀释倍数÷样本蛋白浓度（gprot/L）

注意事项

1. 使用前轻轻晃动各类试剂，确保各成分均匀条件下使用。

2. 水浴加热时，注意避免液体暴沸溅出。

3. 本试剂盒可用吸光度法和荧光强度法进行MDA检测，当样品浓度过低，建议使用荧光强度法进行检测；如果设备不允许的情况下，可通过提高样品在样品和MDA检测工作液混合液中占比；也可以适当延长95℃孵育时间。

4. 标准品换算法分析数据时，需待测样品和标准品浓度处于试剂盒线性检测量程内；标准曲线法分析数据时，确保标准曲线R²＞0.99。

5. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测吸光度法50、25、12.5、6.25、3.125、0 μmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₅₃₂结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=0.0045X-0.0005，R²=0.9999。

根据说明书信息检测荧光强度法10、8、6、4、2、0 μmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₅₃₂结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=866.11X-13.095，R²=1。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书吸光度法操作测的一例细胞样本的OD₅₃₂为0.094，空白样本的OD₅₃₂为0.042，计算此样本的△OD₅₃₂为0.052。采用单孔计算时，根据50 μmol/L标准品的△OD₅₃₂为0.225，计算细胞样本丙二醛浓度为0.052÷0.225×50 =11.556 μmol/L；采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₅₃₂ 0.052代入标准曲线拟合方程，计算出丙二醛浓度为（0.052+0.0005）÷0.0045=11.667 μmol/L。

按照说明书荧光强度法操作测的一例细胞样本的OD₅₃₂为2590，空白样本的OD₅₃₂为357，计算此样本的△OD₅₃₂为2233。采用单孔计算时，根据4 μmol/L标准品的△OD₅₃₂为3484，计算细胞样本丙二醛浓度为2233÷3484×4 =2.564 μmol/L；采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₅₃₂ 2233代入标准曲线拟合方程，计算出丙二醛浓度为（2233+13.095）÷866.11=2.593 μmol/L。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）