产品信息

产品简介

过氧化氢酶（CAT）是广泛存在于植物、动物和微生物体内的一种抗氧化酶，其通过催化过氧化氢（H₂O₂）分解为水和氧气，来清除体内过氧化氢，是生物防御体系中的关键酶之一。

CAT催化H₂O₂分解反应，可以被钼酸铵迅速终止，并且剩余的H₂O₂和钼酸铵相互作用产生一种淡黄色的络合物。该络合物能够在波长405 nm处测定，可根据络合物的变化量来计算CAT的活力。

储存与运输

冰袋(wet ice)运输；2-8℃避光保存，6个月有效。

组成

操作步骤

1. 样品准备：

1.1. 血浆、血清样品：可直接用于CAT活力检测；

1.2. 组织样品：使用合适的缓冲液（PBS、生理盐水等）进行匀浆裂解，组织和试剂的比例为1：9（0.1 g：0.9 mL）即可；匀浆后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续CAT检测；

1.3. 发酵液及细胞样品：细胞离心后，使用合适的缓冲液重悬发酵液及细胞，大约每1~2 × 10⁶个发酵液或细胞加500 μL PBS，匀浆；匀浆后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续CAT检测；

2. 检测准备工作：

2.1. 过氧化氢标准品配制：根据需要，使用超纯水将过氧化氢标准品（9.9 mol/L）进行梯度稀释（例如取其10 μL标准品加入980 μL超纯水中，稀释为100 mmol/L，并进一步梯度稀释做标准曲线，即100/50/25/12.5/6.25/3.125/0 mmol/L），与待测样品进行后续检测后，用于标准曲线法数据分析；

2.2. 显色工作液配制：显色剂：澄清剂=10：1配制成显色工作液（现配现用）。

注意：澄清剂低温会凝固，37℃水浴溶解即可；显色剂存放过程中析出属于正常现象，75℃左右水浴复溶后不影响使用效果。

3. CAT检测：

3.1. 根据下表操作进行CAT检测：

4. 数据分析：

数据分析前，需计算待测组织或发酵液、细胞样品蛋白浓度。可通过BCA蛋白定量检测试剂盒（Y2037）对待测样品进行蛋白浓度检测（1 mmol/L=1 μmol/mL）。

定义：37℃条件下，每毫升血清血浆或每毫克组织蛋白，每分钟分解1 μmol的H₂O₂为一个活力单位；

4.1. 根据梯度稀释数据绘制标准曲线：Y=a X+ b

4.2. 血清、血浆样品CAT活力计算：

4.3. 组织、发酵液、细胞样品CAT活力计算：

Y为标准组值-空白组值（0 mmol/L标准品组数值）；X为标准品过氧化氢浓度；a为标准曲线斜率；b为标准曲线截距；ΔA为：对照组OD值-测定组OD值；V₁为底物体积（0.01mL）；V₂为样本体积（0.01mL）；1^*为反应时间（1 min）；C_pr为样本的蛋白浓度（mgprot/mL）；f为稀释倍数。

注意事项

1. 过氧化氢不稳定，但并不会影响结果相对趋势。如果需要绝对数据，客户可对本产品中过氧化氢标准品浓度进行标定或自备过氧化氢试剂。

2. 如孔中有气泡，请用枪轻轻吹破，以免影响数据准确性。

3. 为了数据的准确性，确保标准曲线R²＞0.99。

4. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测100、50、25、12.5、6.25、3.125、0 mmol/L梯度样本的吸光度结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，△OD₄₀₅结果为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=0.0038X+0.0002，R²=1。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书操作测的一例血清样本的OD₄₀₅为0.357，空白样本的OD₄₀₅为0.051，计算此样本的△OD₄₀₅为0.306。采用标准曲线计算时，将此样本的△OD₄₀₅0.553代入标准曲线拟合方程，计算出血清样本过氧化氢酶（CAT）浓度为（0.306-0.0002）÷0.0038×0.01÷1÷0.01=80.474U/mL。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）