产品信息

产品描述

超氧化物歧化酶（SOD）能够催化超氧化物阴离子发生歧化作用，生成过氧化氢和氧气，是生物体内一种重要的抗氧化酶，对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用。

本试剂盒采用WYT-1法对SOD活性进行检测分析。原理如下：黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶的作用下产生超氧化物阴离子，超氧化物阴离子可以与WYT-1反应产生黄色水溶性甲臜染料。SOD能够催化超氧化物阴离子发生歧化反应，降低超氧化物阴离子含量，即SOD的活性与甲臜染料的生成呈现负相关性。因此可通过对WYT-1产物的比色分析计算SOD的活力。

储存与运输

冰袋运输；PBS缓冲液，2-8℃保存；其他组分-20℃避光保存，6个月有效。 

试剂盒组成

操作步骤

1. 样品准备：

1.1. 血浆、血清样品：可直接用于T-SOD活力检测；

1.2. 组织样品：使用合适的缓冲液（PBS缓冲液、生理盐水等）进行匀浆裂解，其中组织和试剂的比例为1比9（0.1 g：0.9 mL）即可；匀浆裂解后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续T-SOD活力检测；

1.3. 细胞样品：细胞收集后，可使用合适的缓冲液重悬细胞，大约每1×10⁶个细胞加300-500 μL PBS缓冲液或生理盐水；匀浆处理后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续T-SOD活力检测；

注意：样本中尽量不要含有SDS、Triton-X-100、Tween20等表面活性剂以及还原型谷胱甘肽、DTT、2-巯基乙醇等还原剂。

2. 检测前准备：

2.1. SOD显色底物：SOD检测缓冲液以1：100混匀配制成SOD检测工作液，现配现用；

2.2. 酶贮备液吹匀后与SOD检测缓冲液以1：20混匀配制成酶工作液，现配现用；

3. T-SOD检测：

3.1. 根据下表操作进行检测：

注意：检测工作液加入后，立即开始反应，建议使用多道移液枪添加检测工作液，以减少实验误差；

4. 数据分析：

数据分析前，需计算待测组织或细胞样品蛋白浓度。可通过BCA蛋白定量检测试剂盒（Y2037）对待测样品进行蛋白浓度检测。

定义：在本反应体系中，SOD的抑制率达到50%时所对应的酶量为一个SOD活力单位（U）；

4.1. 结果计算：

4.1.1. T-SOD抑制率计算公式：

4.1.2. 血清（浆）等液体样品中T-SOD活力计算公式：

4.1.3. 组织、细胞中T-SOD活力计算公式：

ΔA₁为对照OD值-对照空白OD值；ΔA₂为测定OD值-测定空白OD值；i为T-SOD抑制率（%）；V₁为反应总体积（0.24 mL）；V₂为样品体积（0.02 mL）；C_pr为样本的蛋白浓度（mgprot/mL）；f为稀释倍数。

注意事项

1. 如果样品有颜色或含有少量抗氧化物质，则需设置测定空白孔；反之可不设置测定空白孔。数据分析时，计算抑制率，可用对照空白孔OD值替代测定空白孔OD值。

2. 本试剂盒检测SOD的抑制率范围需在30-70%，以40-60%抑制率为佳。正式检测前，建议选择差异较大的几个样品稀释成不同浓度进行预实验，确保处于检测范围内。

3. 如孔中有气泡，请用移液枪轻轻吹破，以免影响检测结果。

4. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录：技术参数

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）