产品信息

产品简介

ATP是细胞内重要的能量分子，在细胞的各类生理生化活动中起着重要的作用，被称为生物体内能量货币。本试剂盒运用萤光素酶在ATP提供能量的情况下，催化萤光素产生化学发光反应，且在一定范围内，发光强度与ATP含量成正比的原理，可对样品间ATP进行有效检测。

储存与运输

干冰运输；-80℃避光保存，6个月有效；-20℃避光保存，建议3个月内使用。

组成

操作步骤

1. 样品准备：

1.1. 组织样品：添加裂解液到组织（1：9比例，即0.1 g：0.9 mL）中进行匀浆裂解；匀浆5-10 min左右，并煮沸2 min；流水冷却后，4℃，10000 g离心10-15 min，取上清置于冰上待用；

1.2. 细胞样品：细胞收集后，使用裂解液重悬细胞（约每2×10⁶个细胞加200-300 μL）匀浆5 min左右，并煮沸2 min；流水冷却后，4℃，10000 g离心10-15 min，取上清置于冰上待用；

2. 检测准备工作：

2.1. ATP检测标准品配制：根据需要，使用超纯水将ATP标准品（200 μmol/L）进行梯度稀释（例如稀释至4/2/1/0.5/0.25/0.125/0 μmol/L），与待测样品进行后续检测后，用于标准曲线法数据分析；

2.2. ATP检测工作液配制：将ATP检测酶试剂和ATP检测缓冲液按1：50配制成ATP检测工作液（根据实际组数配制，现配现用）

3. ATP检测：

参考下表进行ATP检测：

注意：为了实验数据的准确性，尽量避免添加不同样品间的时间过长。

4. 数据分析：

4.0.1. 根据梯度稀释的标准组值-空白组值数据使用Excel等软件绘制标准曲线：Y=a X+ b

注意：标准品的单位是μmol/L，后续计算用到的体积与质量单位分别是L与kg，kg/L=g/mL。

4.0.2. ATP含量计算：

Y为标准组值-空白组值；X为ATP含量；a为标准曲线斜率；b为标准曲线截距；ΔA为：样品组值-空白组值；V为匀浆裂解组织或细胞使用的裂解液的体积（L）；m为组织湿重（kg）；n为细胞量（10⁶个）；f为稀释倍数。

注意事项

1. 使用前充分溶解并轻轻晃动各类试剂，确保各成分均匀条件下使用。

2. 初次使用可视情况适当分装储存，以避免反复冻融影响试剂性能。

3. 标准品换算法分析数据时，需待测样品和标准品浓度处于试剂盒线性检测量程内；标准曲线法分析数据时，确保标准曲线R²＞0.99。

4. 为了防止孔间干扰，推荐使用不透光白色孔板。亦可使用不透光黑色孔板，但是黑色会吸收萤光信号，降低检测的萤光信号。

5. 建议避光操作且检测时间尽量控制在短时间内，推荐使用排枪进行加样，并注意排枪各孔的吸液量是否一致。

6. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

附录1：技术参数

附录2：标准曲线制作示例（数据仅供参考）

根据说明书信息检测4、2、1、0.5、0.25、0.125μmol/L梯度样本的荧光值结果如下示例：

以样本浓度为横坐标，荧光值差值为纵坐标，得到的标准曲线拟合方程为Y=46206X-7056.2，R²=9947。

附录3：样本检测示例（数据仅供参考）

按照说明书操作测的一例组织样本荧光值为31418，空白荧光值为642。采用标准曲线计算时，将此样本的荧光值为30776代入标准曲线拟合方程，计算出组织ATP浓度为（30776+7056.2）÷46206*0.9÷0.1=7.37μmol/kg。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）