产品信息

产品简介

本产品用于鉴定小鼠单克隆抗体的亚型，包括重链IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM，轻链kappa light chain、lambda light chain在内的各种亚型。

储存与运输

冰袋运输，4℃保存，有效期6个月。开封后1周内使用完。

组成

操作步骤

1. 材料准备

1.1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，以平衡至室温。

1.2. 用双蒸水将30×浓缩洗涤液和30×浓缩缓冲液分别稀释成1×工作液（1ml浓缩液+29ml双蒸水）。未用完的放回4℃保存。

1.3. 酶标板条：根据样本数量选取酶标板条数（测定1个样本需要1条酶标板条），余下板条置于密封袋中，4°C 保存。

1.4. 1×IgM+IgG-HRP：按当次试验所需要的用量，使用前20分钟，用1×缓冲液将100×羊抗鼠IgM+IgG-HRP稀释成1×工作液，现配现用。

2. 样本准备

2.1. 杂交瘤细胞上清：用1×缓冲液将样本按1:100稀释，例如10 μL杂交瘤细胞上清+ 990 μL 1×缓冲液。推荐稀释范围为1:20-1:200。

2.2. 腹水：用1×缓冲液将样本按1:100000稀释，例如1 μL腹水+99 uL 1×缓冲液（1:100），再取上述混合液1 μL+1mL 1×缓冲液（1:1000）。推荐稀释范围为1:50000-1:200000。

2.3. 纯化抗体：用1×缓冲液将样本按1:10000稀释，例如1 μL抗体+99 μL 1×缓冲液（1:100），再取上述混合液10 μL+990 μL 1×缓冲液（1:100）。推荐稀释浓度范围为20 ng/mL-1 μg/mL。

3. 单克隆抗体亚型鉴定

3.1. 将待测样本适当稀释，按每孔100 μL加入酶标板中(一列检测一个样本），用封板膜封板，37 ℃恒温孵育30分钟。

3.2. 提前5分钟准备1×IgM+IgG-HRP工作液。

3.3. 甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350 μL，静置30秒后甩尽液体，在吸水纸上拍干。重复3次。

3.4. 将配好的1×IgM+IgG-HRP工作液按每孔100 μL加入酶标板中，用新封板膜封板，37℃恒温避光孵育30分钟。

3.5. 甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350 μL，静置30秒后甩尽液体，在吸水纸上拍干。重复5次。

3.6. 将显色液按每孔90 μL加入酶标板中。

3.7. 室温避光显色5-10 min。肉眼判断出现结果则每孔加入50 μL终止液。

3.8. 结果：结果可以对照下图以肉眼判定，也可以通过酶标仪读取OD 450（酶标仪需要提前打开预热30min）。颜色最深或是OD值最高孔对应的即为相应亚型。

说明

a. A行包被总IgG+IgM抗体，捕获所有亚型抗体，作为阳性对照；

b. B行包被重链IgG1亚型抗体，捕获IgG1亚型的单抗；

c. C行包被重链IgG2a亚型抗体，捕获IgG2a亚型的单抗；

d. D行包被重链IgG2b亚型抗体，捕获IgG2b亚型的单抗；

e. E行包被重链IgG3亚型抗体，捕获IgG3亚型的单抗；

f. F行包被重链IgM亚型抗体，捕获IgM亚型的单抗

g. G行包被轻链kappa亚型抗体，捕获kappa型轻链的单抗

h. H行包被轻链Lambda亚型抗体，捕获Lambda型轻链的单抗

结果判断

a. A行必须有阳性，如无阳性，结果无效；

b. B-F行只出现一种阳性，如出现多重阳性，建议稀释再测；

c. G-H行只出现一种阳性

注意事项

余下板条应密封保存。如短期不用，可置于-20°C保存。

常见问题及解答：

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）