规格 Recombinant TEV Protease (His-tag) G3409-5000U 5000U 产品简介 本产品Recombinant TEV Protease是在大肠杆菌中重组表达带His标签(His-tag)的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus,TEV)半胱氨酸蛋白酶。TEV Protease是一种常用的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser(E-N-L-Y-F-Q-G/S)，并在Gln(Q)和Gly/Ser(G/S)氨基酸残基之间进行酶切。Recombinant TEV Protease最适酶切温度为30℃，在29-34℃范围均有较高的酶活性，但当温度达到或高于37℃时，其酶活性会急剧下降。在实际操作过程中，为尽量保留目的蛋白结构和生物活性，建议在4℃用TEV Protease酶切过夜。Recombinant TEV Protease在pH 6.0-9.0范围内具有活性，而当pH小于或等于5时，会失去酶活性。TEV Protease在400 mM咪唑中仍有较高活力，因此对于使用鎳柱纯化含有His标签目的蛋白，可直接将TEV Protease加入含高浓度咪唑的纯化的目的蛋白溶液中，在4℃透析去除咪唑同时进行酶切，也可以在透析后再用TEV Protease进行酶切以去除His标签。经过酶切后目的蛋白溶液中带有His标签的TEV Protease以及切除的His标签，都可以通过与镍柱结合而去除。 应用 ：常用于去除融合蛋白中MBP、GST、His或其他标签蛋白。Recombinant TEV Protease本身带有His标签可以与镍柱结合。 来源 ：烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus，TEV)半胱氨酸蛋白酶，大肠杆菌重组表达，含His标签。 酶活定义 ：在30℃，pH 8.0条件下，1 h内可以将3 μg底物（含有Recombinant TEV Protease酶切位点的蛋白）切割85%以上所需酶量为一个酶活单位。 失活或抑制 ：常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF、AEBSF、bestatin、pepstatin等和EDTA不会抑制TEV Protease活性。而靶向半胱氨酸残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等，可以显著抑制TEV Protease的酶活力。在较高浓度咪唑中TEV Protease仍保持较高酶活性。 纯度及浓度 ：SDS-PAGE检测纯度≥95%，10 U/μL。 Recombinant TEV protease储存液 ：50 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，1 mM EDTA，5 mM DTT，50% (v/v) Glycerol，pH 8.0。 10×TEV Buffer ：500 mM Tris-HCl，500 mM NaCl，5 mM EDTA，10 mM DTT，pH 8.0。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。 组成 Component Number Component G 3409-5000U G3409-1 Recombinant TEV Protease (His-tag) (10 U/μL) 500 μL G3409-2 10×TEV Buffer 3×1 mL G3409-3 Control Protein 100 μL 产品说明书 1份 操作 步骤 1. 蛋白酶切体系推荐： Component Volume 10×TEV Buffer 5 μL 目的蛋白 30 μg Recombinant TEV Protease (His-tag) (10 U/μL) 1 μL ddH 2 O To 50 μL 2. 将上述反应体系置于30℃反应1-4 h。如果目的蛋白在30℃稳定性不佳，可考虑将反应体系置于4℃过夜酶切（约16 h左右）； 3. 取酶切产物10 μL样品进行SDS-PAGE电泳检测，可以评估酶切用量和反应条件。 注意事项 1. 酶制品使用时应放在冰盒内或冰浴，使用完毕后应立即放置于-20℃保存，建议分装保存； 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 酶切应用实例 图1：Recombinant TEV Protease酶切对照底物蛋白（A+B融合蛋白，其中含有Recombinant TEV Protease酶切位点）效果图（酶切条件30℃、pH 8.0，分别酶切0 min、10 min、20 min、30 min、1 h、2 h，依次对应泳道Lane：1-6，酶切体系中加入底物与酶质量比为20：1）。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）