规格 Ni-NTA SweAgrose 6 Fast Flow G2222-25ML 25 mL 产品简介 Ni-NTA SweAgrose 6 Fast Flow 是一种将螯合了镍离子的 NTA 配基键合在琼脂糖微球上形成的金属离子螯合亲和层析分离介质。固定化金属离子亲和层析（NTA）利用了Ni 2+ 与蛋白质上某些氨基酸（主要是组氨酸，较少量的半胱氨酸和色氨酸）的侧链之间的相互作用而进行分离纯化。 特点：使用范围广、操作简单、适合重力柱及预装柱； 高流速、高载量、Ni 2+ 脱落低，试剂兼容性广； 多重选择，可以螯合各种金属离子进行使用，通常是Zn 2+ 、Ni 2+ 、Cu 2+ 或Co 2+ 。 储存与运输 冰袋运输，2-8℃保存24个月 性能参数 指标名称 描述 产品内容 66%(v/v) 琼脂糖凝胶，保存于20%乙醇中 凝胶类型 6%交联琼脂糖凝胶 配基 -NTA- Ni 2+ 粒径范围（μm） 45 - 165 平均粒径（μm） 90 结合载量 20-50 mg (His标签蛋白)/mL介质 配基密度（μmol/mL） ~ 25 运行流速（cm/h） ≤600 耐压（MPa） 0.3 化学稳定范围 常用的水相缓冲液；0.01 M盐酸，0.1 M氢氧化钠 （1周）；1 M氢氧化钠，70%乙酸（1天）；2% SDS（1小时）；30% 2-丙醇（30分钟） 贮存 2-8℃ 20%乙醇 产品使用方法： 1. 缓冲液准备 : 根据分离目标性质配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液如： 平衡液：20 mM PB/Tris 500 mM NaCl (20-40 mM Imidazole ) pH 7.4-8.0 洗脱液：20 mM PB/Tris 500 mM NaCl 500 mM Imidazole pH 7.4-8.0 备注：当纯化包涵体时 溶液添加8 M Urea或6 M Gua-HCl。 2. 平衡： 将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱，观察检测器的变化，直到电导、pH 等参数不变。 3. 样品制备： 样品的预处理：缓冲液置换（与平衡液保持一致）； 样品过滤：0.22 μm-0.8 μm滤膜过滤(依据平均粒径选择不同孔径滤膜)。 2. 纯化流程： 1. 水洗：以操作流速冲洗2~3个柱体积； 2. 平衡：将平衡缓冲液以操作流速平衡5个柱体积，观察检测器的变化，直到电导、pH等参数不变； 3. 上样：将样品以操作流速上样； 4. 淋洗：用5-10个柱体积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱，观察检测器的变化，直到电导、pH及UV等参数不变； 5. 洗脱：可用 5 -500 mM 范围内的咪唑溶液（含500 mM NaCl）进行恒定洗脱、梯度洗脱（线性梯度/阶梯式），一般推荐梯度洗脱方式进行洗脱以获得更好的蛋白纯化效果。 5. 再生： 5 .1 脱镍流程： 1. 用脱镍缓冲液（500 mM NaCl，50-100 mM EDTA，pH 7.4）冲洗3~5 个柱体积； 2. 去离子水冲洗 5-10 个柱体积； 3. 用5个柱体积的20%乙醇冲洗柱子后储存。 5 .2 重新挂镍： 1. 去离子水冲洗 5-10 个柱体积去掉20%乙醇保存液； 2. 加入3个柱体积的100 mM的NiSO 4 重新上镍； 3. 用含100 mM NaCl平衡缓冲液或水去除过量的镍后备用。 注意： 当填料多次使用出现柱料颜色变浅、有明显污染或出液速度慢等问题导致结合效率降低的情况时建议进行在位清洗。当纯化过程发生蛋白沉淀等问题时需要进行在位清洗。 6. 在位清洗（CIP）： 介质经过长期使用后，过多的污染物会使柱床反压增大，从而降低柱效与介质吸附载量，甚至损害介质的寿命。定期 CIP 可有效保护介质。如果介质轻微污染，可每 1-5 次循环进行一次 CIP。但对于实验后污染严重的介质，必须立即进行 CIP处理。在脱镍的情况下可按下述方法对介质进行 CIP： 1. 用 1.5 M NaCl 清洗数个柱体积，以去除离子结合的蛋白质，随后用去离子水冲洗约 10 个柱体积； 2. 用 1 M NaOH 清洗层析柱，以去除沉淀蛋白、疏水结合蛋白和脂蛋白，接触时间通常为 1-2 小时（内毒素去除时间为 12 小时或更长），随后用去离子水冲洗约 10 个柱体积； 3. 用70%乙醇或30%异丙醇冲洗层析柱 5-10 个柱体积，随后用去离子水冲洗约 10 个柱体积。 试剂兼容性 缓冲液 50 mM sodium phosphate, pH 7.4 100 mM Tris-HCl, pH 7.4 100 mM Tris-acetate, pH 7.4 100 mM HEPES, pH 7.4 100 mM MOPS, pH 7.4 100 mM sodium acetate, pH 4 变性剂 8 M Urea 6 M Gua-HCl 去污剂 2% Triton X-100 2% Tween 20 2% NP-40 2% Cholate 1% CHAPS 还原剂 5 mM DTE 2 mM DTT 20 mM β-mercaptoethanol 5 mM TCEP 10 mM reduced glutathione 其他添加剂 500 mM Imidazole 20% Ethanol 50% Glycerol 100 mM Na2SO4 1.5 M NaCl 1 mM EDTA 60 mM Citrate 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）