规格 SweMagrose Protein A抗体纯化磁珠 G3656-1ML 1 mL G3656-5ML 5 mL 产品简介 Protein A是一种发现于金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus )的细胞壁表面蛋白，分子量为42 kDa；Protein G是C型或G型链球菌(Streptococcal bacteria)表达的免疫球蛋白结合蛋白；Protein A和Protein G功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)结合；经重组改造的Protein A、G与磁珠以一定的方式结合，可用于免疫沉淀或抗体的纯化；Protein A磁珠适合于免疫沉淀human IgG1、IgG2、IgG4，mouse IgG2a、IgG2b等，而Protein G磁珠适合于免疫沉淀human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3，rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c等多克隆抗体（具体信息见附表一）； 本产品采用自主研发生产的Protein A蛋白标记磁珠，与市场上同类产品相比，该产品结合抗体效率更高，非特异性结合率更低，配合优化后的缓冲液，可便捷高效的进行免疫沉淀实验；可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中目标蛋白的分离与纯化。 产品信息： 特点 描述 产品内容 50 mg/ml磁珠保存于特殊保存液中 磁性类型 超顺磁性 偶联蛋白 Protein A 偶联蛋白分子量 ~25 kDa（Protein A） 结合蛋白能力 >1mg小鼠抗体每毫升磁珠 特异性 来自不同物种的抗体，包括兔、小鼠、人源、大鼠、山羊、绵羊、牛 磁珠尺寸 30~150 μm 洗脱方法 酸洗脱或1×蛋白上样缓冲液（还原型）洗脱 注意：如果使用1×蛋白上样缓冲液（还原型）洗脱，抗体的重链（~50 kDa）和轻链（~25 kDa）会从磁珠上变性释放出来 应用 蛋白免疫沉淀，蛋白免疫共沉淀，蛋白纯化分离 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；2-8℃保存，12个月有效期。 组成 Component Number Component G3656-1 ML G3656-5 M L G3656 SweMagrose Protein A抗体纯化磁珠 1 mL 5 mL 说明书 1份 实验准备 抗体纯化相关试剂配方参考如下，用户可根据具体实验情况自行调整 Component Reagent combination 结合洗涤液 PBST：137 mM NaCl，2.7 mM KCl, 10 mM Na 2 HPO 4 , 2.0 mM KH 2 PO 4 , 0.1% Tween-20 洗脱液 100 mM Gly, 0.1% Tween-20, pH 2.5 中和液 1.0 M Tris-HCl, pH 9.0 保存液 PBST，0.1%(v/v) Proclin 300 手动 操作步骤 （以纯化小鼠腹水 I g G 为例） 1. 样本处理 ：取腹水样本500 μL，不足的加入结合洗涤液补足500 μL，若样本中有较多蛋白沉淀离心后取上清进行实验，可提高抗体纯度； 2. 磁珠预处理 ：将抗体纯化磁珠涡旋振荡30 s，使其充分重悬，取100 μL 50%（v/v） SweMagrose Protein A抗体纯化磁珠置于另一新1.5 mL EP管中，磁吸后弃上清，用1 mL结合洗涤液洗涤2次，磁吸分离后取上清； 注意： 磁珠量可根据样本中抗体含量调节； 3. 抗体吸附 ：向步骤2磁珠中加入步骤1处理的样本，涡旋混匀，在室温下（约25℃）置于翻转混合仪或者手动轻柔翻转EP管，使磁珠与样本充分接触，翻转15 min后置于磁分离架上磁吸30 s，吸除上清液； 4. 磁珠洗涤 ：向EP管中加入1 mL结合洗涤液，振荡重悬后磁吸30 s，弃上清，重复操作3次； 5. 抗体洗脱 ：在上述完成磁珠洗涤的EP管中加入 0.5~1.0 mL洗脱液，用移液器吹打或者涡旋震荡下迅速重悬，然后在室温下（约25℃）置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管，翻转10 min后进行磁吸分离，收集上清液至新的EP管。 6. 抗体中和： 在步骤5抗体洗脱液中加入一定量的中和液，一般为抗体洗脱体积的1/10（例如抗体洗脱液为500 μL，则中和液的添加量为50 μL），最终使洗脱的抗体pH 值保持中性环境，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活； 7. 磁珠后处理： 使用后的磁珠用洗脱液洗涤2次，磁吸分离，弃上清液；接着用结合洗涤液洗涤3次，磁吸分离，弃上清液，加入200 µL保存液重悬磁珠，置于2~8℃保存。 注意事项 1. 进行抗体纯化前，请务必认真阅读本操作说明书。 2. 磁珠请勿冷冻或者离心，以免引起磁珠不可逆聚集。 3. 手动操作需配合磁分离架使用。 4. 附表一 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）