规格 SweAgarose Protein A抗体纯化琼脂糖凝胶 G2206-1ML 1 mL G2206-5ML 5 mL 产品简介 Protein A是一种发现于金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus )的细胞壁表面蛋白，分子量为42 kDa；Protein G是C型或G型链球菌(Streptococcal bacteria)表达的免疫球蛋白结合蛋白；Protein A和Protein G功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)结合；经重组改造的Protein A、G与凝胶以一定的方式结合，可用于免疫沉淀或抗体的纯化；Protein A凝胶适合于结合human IgG1、IgG2、IgG4，mouse IgG2a、IgG2b等，而Protein G凝胶适合于结合human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3，rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c等多克隆抗体（具体信息见附表一）。 本产品采用自主研发生产的重组耐碱Protein A蛋白标记凝胶，与市场上同类产品相比，该产品结合抗体效率更高，非特异性结合率更低，配合优化后的缓冲液，可便捷高效的进行免疫沉淀实验，最高可耐受0.5 M NaOH；可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中目标蛋白的分离与纯化。 产品信息： 特点 描述 产品内容 50%(v/v) 琼脂糖凝胶保存于特殊保存液中 凝胶类型 6%交联琼脂糖凝胶 偶联蛋白 Protein A 偶联蛋白分子量 ~25 kDa（Protein A） 结合蛋白能力 >1mg小鼠抗体每毫升凝胶 特异性 来自不同物种的抗体，包括小鼠、人源、大鼠、山羊、绵羊、牛 凝胶尺寸 30~150 μm 洗脱方法 酸洗脱或1×蛋白上样缓冲液（还原型）洗脱 注意：如果使用1×蛋白上样缓冲液（还原型）洗脱，抗体的重链（~50 kDa）和轻链（~25 kDa）会从凝胶上变性释放出来 应用 蛋白免疫沉淀，蛋白免疫共沉淀，蛋白纯化分离 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；2-8℃保存，12个月有效期。 组成 货号 组成 G2206-1 ML G2206-5 M L G2206 SweAgarose Protein A抗体纯化琼脂糖凝胶 1 mL 5 mL 说明书 1份 实验准备 抗体纯化相关试剂配方参考如下，用户可根据具体实验情况自行调整 Component Reagent combination 结合洗涤液 PBST：137 mM NaCl，2.7 mM KCl, 10 mM Na 2 HPO 4 , 2.0 mM KH 2 PO 4 , 0.1% Tween-20 洗脱液 100 mM Gly, 0.1% Tween-20, pH 2.5 中和液 1.0 M Tris-HCl, pH 9.0 保存液 PBST，0.1%(v/v) Proclin 300 手动 操作步骤 （以纯化小鼠腹水 I g G 为例） 1. 样本处理 ：取腹水样本500 μL，不足的加入结合洗涤液补足500 μL，若样本中有较多蛋白沉淀离心后取上清进行实验，可提高抗体纯度； 2. 凝胶预处理 ：将抗体纯化凝胶涡旋振荡30 s，使其充分重悬，取100 μL 50%（v/v） SweAgarose Protein A抗体纯化凝胶置于另一新1.5 mL EP管中，6000×g在4℃离心30s，吸除上清，用1 mL结合洗涤液洗涤2次，离心分离后弃上清； 注意： 凝胶量可根据样本中抗体含量调节； 3. 抗体吸附 ：向步骤2凝胶中加入步骤1处理的样本，涡旋混匀，在室温下（约25℃）置于翻转混合仪或者手动轻柔翻转EP管，使凝胶与样本充分接触，翻转15 min后，6000×g在4℃离心30s，吸除上清液； 4. 凝胶洗涤 ：向EP管中加入1 mL结合洗涤液，振荡重悬后，6000×g在4℃离心30s，弃上清，重复操作3次； 5. 抗体洗脱 ：在上述完成凝胶洗涤的EP管中加入 0.5~1.0 mL洗脱液，用移液器吹打或者涡旋震荡下迅速重悬，然后在室温下（约25℃）置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管，翻转10 min后，6000×g在4℃离心30s，收集上清液至新的EP管。 6. 抗体中和： 在步骤5抗体洗脱液中加入一定量的中和液，一般为抗体洗脱体积的1/10（例如抗体洗脱液为500 μL，则中和液的添加量为50 μL），最终使洗脱的抗体pH 值保持中性环境，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活； 7. 凝胶后处理： 使用后的凝胶用洗脱液洗涤2次，，6000×g在4℃离心30s，弃上清液；接着用结合洗涤液洗涤3次，，6000×g在4℃离心30s，弃上清液，加入200 µL保存液重悬凝胶，置于2~8℃保存。 注意事项 1. 进行抗体纯化前，请务必认真阅读本操作说明书。 2. 凝胶请勿冷冻或者离心，以免引起凝胶不可逆聚集。 附表一 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）