规格 蛋白免疫沉淀试剂盒（Protein A琼脂糖凝胶法） G2215-50T 50T 产品简介 免疫沉淀或免疫共沉淀是研究蛋白或蛋白之间相互作用（Protein-Protein Interactions，PPIs）的常用技术，通过使用特异性抗体和可结合抗体的介质（如Protein A/G Agarose或Protein A/G Magrose）或直接使用偶联特异性抗体的介质（如琼脂糖凝胶或磁珠），通过离心或磁力从溶液中分离出抗原和抗体复合物，从而达到分离和纯化目标蛋白的目的，随后可用于蛋白免疫印迹（Western Blot）或质谱分析；Protein A是一种发现于金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus )的细胞壁表面蛋白，分子量为42 kDa；Protein G是C型或G型链球菌( Streptococcal bacteria )表达的免疫球蛋白结合蛋白；Protein A和Protein G功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)结合；经重组改造的Protein A、G与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可用于免疫沉淀；Protein A琼脂糖凝胶适合于免疫沉淀human IgG1、IgG2、IgG4，mouse IgG2a、IgG2b等，而Protein G琼脂糖凝胶适合于免疫沉淀human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3，rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c等多克隆抗体（具体信息见附表一）。 本产品采用自主研发生产的Protein A蛋白标记琼脂糖凝胶，与市场上同类产品相比，该产品结合抗体效率更高，非特异性结合率更低，配合优化后的缓冲液，可便捷高效的进行免疫沉淀实验；可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中目标蛋白的分离与纯化；本试剂盒提供两种洗脱方法（变性洗脱和酸洗脱）对目的蛋白进行洗脱。 产品信息 特点 描述 产品内容 50%(v/v) 琼脂糖凝胶保存于特殊保存液中 凝胶类型 6%交联琼脂糖凝胶 偶联蛋白 Protein A 偶联蛋白分子量 ~25 kDa（Protein A） 结合蛋白能力 >1mg小鼠抗体每毫升凝胶 特异性 来自不同物种的抗体，包括小鼠、人源、大鼠、山羊、绵羊、牛 凝胶尺寸 30~150 μm 洗脱方法 酸洗脱或1×蛋白上样缓冲液（还原型）洗脱 注意：如果使用1×蛋白上样缓冲液（还原型）洗脱，抗体的重链（~50 kDa）和轻链（~25 kDa）会从凝胶上变性释放出来 应用 蛋白免疫沉淀，蛋白免疫共沉淀，蛋白纯化分离 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；5×蛋白上样缓冲液（还原型）请保存于-20℃，其他2-8℃保存，有效期12个月。 试剂盒 组成 货号 组成 G2215- 50T 储存温度 G2038 IP裂解液 50 mL 2-8℃ G0015 10×TBS缓冲液 5 mL 2-8℃ G2215-1 SweAgarose Protein A 1 mL 2-8℃ G2215-2 Acid Elution Buffer 10 mL 2-8℃ G2215-3 Neulization Elution Buffer 1 mL 2-8℃ G2013 5×蛋白上样缓冲液（还原型） 1 mL -20℃ 说明书 1份 需自备的试剂 Product Name Cat. Number Spec. 50×Cocktail蛋白酶抑制剂 G2006-250UL 250 μL PBS,1×(Phosphate Buffered Saline) G4202-500ML 500 mL 操作步骤 1. 试剂盒的准备： a) 参照下表，按照每个样品使用100-500 μL裂解液的比例，准备相关试剂； 步骤 需要的溶液 体积 体积 细胞裂解和准备 添加了Cocktail蛋白酶抑制剂的IP裂解液 100 μL 500 μL 免疫沉淀 SweAgarose Protein A 4 μL 20 μL 洗涤三次 1×TBS 100 μL 500 μL 酸洗脱与中和 Acid Elution Buffer 20 μL 100 μL Neutralization Buffer 20 μL 100 μL 变性洗脱 1×蛋白上样缓冲液（还原型） 20 μL 100 μL b) 含蛋白酶抑制剂的IP裂解液的配制：参照上表，按照每50-100万细胞使用100-200 μL含蛋白酶抑制剂Cocktail的裂解液用于裂解；将IP裂解液与50×Cocktail蛋白酶抑制剂（推荐 G2006-250UL ）按照50:1的比例混合，例如在1 mL IP裂解液中加入20 μL 50×Cocktail蛋白酶抑制剂，即得1 mL含蛋白酶抑制剂的IP裂解液；配制好的含抑制剂的IP裂解液宜放置在冰浴或4℃； c) 注意：如果免疫沉淀的目标蛋白涉及磷酸化或乙酰化修饰，需要添加磷酸酶抑制剂或去乙酰化酶抑制剂（自备）；含抑制剂的IP裂解液宜现配现用，不宜配制后冻存并留作后续使用； d) 1×TBS的配制：将10×TBS缓冲液用超纯水稀释至1×，即为1×TBS；例如1 mL 10×TBS缓冲液加入9 mL超纯水，混匀后即为1×TBS缓冲液； e) 1×蛋白上样缓冲液（还原型）的配制：取适量5×蛋白上样缓冲液（还原型）用超纯水稀释5倍即为1×蛋白上样缓冲液（还原型）；例如0.2 mL 5×蛋白上样缓冲液（还原型）加入0.8 mL超纯水，混匀后即为1×蛋白上样缓冲液（还原型）。 2. 抗原样本制备: 样品裂解后应立即进行后续免疫沉淀或免疫共沉淀实验，如果不能立即进行，可以将样品保存于-20℃或-80℃冰箱，但冻融可能会影响蛋白与蛋白的相互作用；所有的样品裂解步骤应冰浴或4℃操作，以尽量降低蛋白降解的可能性，样品准备好之后取一定量作为Input或Total，以用于后续Western Blot等检测； 对于 组织样品 ： a) 取适量组织用预冷PBS（推荐 G4202 ）洗涤，去除血污，剪成细小碎块置于匀浆器中； b) 按照每10-20 mg组织使用100-200 μL的比例加入含蛋白酶抑制剂的IP裂解液，如果需要更高浓度的蛋白样品，可以适量减少IP裂解液的用量； c) 用玻璃匀浆器或手持式匀浆机进行匀浆，或者使用本公司自主研发的 SWE-FP 低温型研磨仪进行充分研磨； d) 将匀浆液转移至1.5 mL离心管中，振荡混匀，冰浴30 min，期间每10 min用移液器反复吹打，确保组织细胞完全裂解； e) 12000 g 4℃离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液，可进行后续免疫沉淀或免疫共沉淀实验等； 对于 贴壁细胞样品 ： a) 如有必要，可用PBS清洗细胞2-3次，最后一次彻底吸干残留液； b) 用细胞刮刀将细胞刮下或胰蛋白酶消化细胞使其充分悬浮，收集到1.5 mL离心管中1000 g 4℃离心5 min，弃上清即为细胞沉淀； c) 按照每50-100万细胞（相当于6孔板的一个孔）加入100-200 μL含蛋白酶抑制剂的IP裂解液；轻弹管底或适当吹打，冰浴3-...