项目 介绍 ： 免疫电镜 双标 是利用抗原抗体特异性结合原理，在一张超薄切片 （镍网） 上，用 两种不同来源的 特异性一抗 分别 与 两种 待检测抗原结合 ， 然后用带有 两种不同粒径 胶体金标记的二抗 分别 与 对应种属的 一抗抗原复合物结合 。 在电子显微镜下 胶体金为黑色颗粒状物质，根据胶体金颗粒大小在组织和细胞超微结构上分别定位两种抗原， 实现 两种 蛋白于亚细胞水平 （ 如线粒体、内质网等 ） 的定位 及空间位置关系分析。免疫电镜双抗标记，需要选用不同来源的一抗。我司现有4nm和12nm山羊抗小鼠、山羊抗大鼠、山羊抗兔胶体金二抗。如提供其他来源的一抗，需要自行提供对应的胶体金二抗进行试验。 样本准备： 将可孵育抗体的超薄切片，捞于镍网，干燥后防尘送样。 实验步骤： 免疫标记： ①复温水合：镍网从4℃取出用超纯水悬浮5min； ②清洗：TBS室温清洗3次，每次5min； ③封闭：1%BSA/TBS的封闭液室温封闭30min； ④加一抗：将混合抗体与封闭液按一定稀释比稀释后4℃过夜孵育； ⑤清洗：室温复温后，TBS清洗3次，每次5min； ⑥加二抗：将混合二抗与二抗稀释液按一定稀释比稀释，先室温孵育20min，后转37℃烘箱孵育1h，然后转室温复温0.5h。实验过程中防止干片。 ⑦清洗：TBS清洗5次，每次5min后，超纯水清洗5次，每次5min。 ⑧铀复染：镍网于2%醋酸铀饱和酒精溶液避光染色8min；70%酒精清洗3次；超纯水清洗3次。 ⑨烘干：清洗后的镍网用滤纸吸干后放入网板中，37℃烘箱放置10min烘干备用。 备注： 1、Servicebio抗体请到官网查询antibody。如果公司无抗体，需要客户自己提供抗体。 市面上抗体大多未进行免疫电镜标记验证，标记效果不确定。 未标记成功收取一半费用。 2、如果客户使用本公司一抗，需额外收取一抗抗体使用费100元/张。 效果展示 （以下为标注图，最终结果无结构标注，如有需要可联系销售开具标注分析项目） 免疫电镜双抗标记： 仅供科研用途，不可用于临床诊断！