服务介绍：

荧光原位杂交Fish原理是将特定荧光标记的一个或多个已知序列核酸探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而在组织原位结构基础上对特定核酸序列进行精确定量定位的过程。多个探针用不同的荧光素标记可同时检测多个基因在组织上空间位置定位和分布关系。植物组织中由于存在大量叶绿素，叶黄素，木质素，以及其他如阿魏酸、角质素、木栓质、孢粉质等化合物，这些物质具有很强的自发荧光且没有很好的化学方法去除从而极大地限制了荧光原位杂交Fish在植物组织中的应用。

植物组织切片荧光原位杂交Fish标记完成之后用我司配备的徕卡STELLARIS 5超高分辨率白激光共聚焦显微镜扫描成像。采用荧光寿命TauSenes成像技术，根据组织自发光与目标标记荧光素的光寿命不同进行光寿命光谱拆分成像，自动识别并去除各类组织自发荧光。极大地解决了植物组织中各类自发荧光对阳性辨别的干扰。并且采用Navigator全视野、多色多焦点扫描拼图，多孔板多点定位自动扫描成像并拼接成组织全景图像，便于观察整个组织全景结构及荧光分布情况，避免遗漏观察视野。如组织自带一些特定荧光也需扫描成像，请务必提供该荧光染料的激发波长及发射波长等信息。否则在共聚焦扫描成像时，会默认自动去除原位杂交标记的目标荧光素以外的其他荧光信号。

本项目的原位杂交采用SweAMI原位信号放大技术，通过DNA序列重复和DNA分支结构，使得靶标处可以结合大量的信号探针，相比于传统探针直标原位杂交方法有极大优势：

1．该方法理论上实现约4000倍信号放大。使用此方法可以增强信号、提高信噪比，特异性的检测目标靶核酸。背景低，结果可靠。

2．SweAMI探针为多序列混合探针，能进一步提高杂交结合效率。

3．可以做DAB，NBT，AEC，荧光单标，双标，三标，四标。

4．探针合成周期较短，最短2天即可合好，通过流程优化，可以缩短整个实验周期。

实验流程：

植物组织原位杂交固定液（G1112/G1110）固定，4℃低温保存运输——石蜡包埋切片或冰冻切片——确定植物种属确定基因名称，探针设计合成——原位杂交标记——徕卡STELLARIS 5共聚焦成像。

备注：该项目内容只包含原位杂交标记和共聚焦成像。

实验结果展示：

棉花，石蜡切片

组织自发红光

棉花，石蜡切片，Fish三标四色

共聚焦去除组织自发光以后全景扫描成像

送样运输要求：

1、新鲜组织冰切：新鲜组织液氮速冻15s后转-80℃保存，干冰运输，组织全程不能冻融，做冰冻切片。

2、固定组织：取2mm左右厚度的新鲜组织，5min内投入原位杂交固定液（G1112/G1110）内固定，4℃低温保存运输，切勿冷冻结冰。尽快包埋切片后进行原位杂交实验，固定时间过长影响核酸检出率。

3、冰冻切片：冰冻切片-20℃运输。

4、石蜡切片：石蜡切片常温运输。

仅供科研用途，不可用于临床诊断！