项目介绍 ： 该项技术是 组织样品经低温脱水渗透L R White 树脂低温聚合包埋，超薄切片7 0 - 80 nm，用特异性一抗与待检测抗原结合然后用 带有 胶体金 标记的 二抗 与 一抗抗原复合物结合 ，在 电子显微镜 下观察，由于 二抗上的胶体金 形成一定的电子密度而 精确 指示出相应抗原在 亚细胞水平上的定位 。 样本准备： 组织取下后立即投入免疫电镜专用固定液（ G1124-100ML ），4°保存，4°冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。样品固定后应尽快安排做后续包埋和免疫标记实验，减少抗原丢失的可能性。 注意事项： 1 、1-3min内取样，取样组织 1 mm 3 大小。取材前可提前准备装有免疫电镜固定液A液的培养皿，将小组织块离体取下后立即投入培养皿内，用手术刀在培养皿的固定液中进行切割成 1 mm 3 的小组织块。再将切割好的小组织块转移至装有新的免疫电镜固定液的E P 管内继续固定。 2 、取材时尽量精确到需要观察的目的部位（如观察肾小球取肾皮质；观察胰岛取胰岛丰富的胰尾；皮肤，肠胃等在固定液中易打卷的组织可将组织粘在滤纸上进行固定）。 3 、取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤，刀片要锋利避免挫伤组织。 实验步骤： 1、 取材固定 组织 ： 新鲜组织确定取材部位，尽量减小 牵拉、挫伤与挤压等机械损伤， 1-3min内取样，取样组织1mm 3 大小。取材前可提前准备装有免疫电镜固定液的培养皿，将小组织块离体取下后立即投入培养皿内，用手术刀在培养皿的固定液中进行切割成1mm 3 的小组织块。再将切割好的小组织块转移至装有新的免疫电镜固定液的EP管内继续固定 ， 4 ℃固定 保存 及 运输。 细胞、细菌 ： 离心收集细胞或细菌沉淀 ，要求沉淀最少绿豆大小。加入 免疫电镜专用固定液 重悬 混匀固定 ， 4 ℃固定 保存 及 运输。 2、 清洗 组织 ： 用4℃预冷的0.1M磷酸缓冲液PB（pH7.4）在冰盒上漂洗3次，每次10min。 细胞、细菌 ： 细胞或细菌用高速冷冻离心机 4℃ 离心，弃上 清 加入 4℃预冷的0.1M磷酸缓冲液PB（PH7.4） ， 混匀 漂洗 3 min 后再离心，重复 洗涤 3次 。提前加热溶解制备2%琼脂糖溶液，待冷却至40℃左右后加入EP管内，在琼脂糖凝固之前将沉淀用镊子挑起悬浮包裹于琼脂糖内 。 在第一次漂洗时，可加入微量品红染液，使细胞着色，有利于后续切片定位。 3、脱水： 预冷后的梯度酒精进行脱水，依次为30%酒精4℃ 20min，50%酒精-20℃ 20min，70%酒精-20℃ 20min，80%酒精-20℃10min，85%酒精-20℃ 10min，90%酒精-20℃ 10min，95%酒精-20℃ 10min，100%酒精-20℃ 10min，100%酒精-20℃ 10min。 4、 树脂 渗透： 100%酒精：纯树脂=2:1 4℃ 1h；100%酒精：纯树脂=1:1 4℃ 3h；100%酒精：纯树脂=1: 2 4℃ 17-20h；纯树脂 4℃ 17-20h；纯树脂 4℃ 2次，1h/次。 5、包埋： 4℃ ， 先将纯树脂滴入包埋胶囊中，然后将 样本 放入纯树脂中并扣上胶囊帽进行包埋，抽真空0.5h-1h后扣紧胶囊帽。 6、聚合： 低温紫外聚合仪-20℃进行聚合48h以上，后恢复室温 ， 取出树脂块备用 。 效果展示： 仅供科研用途，不可用于临床诊断！