服务介绍： 扩增子测序：提取环境样品的DNA，选择合适的通用引物扩增16S/18S/ITS的目标区域，通过检测目标区域的序列变异和丰度，以研究环境微生物多样性及群落组成差异。基于DNBSEQ-G99基因测序仪，可对动物粪便、土壤等环境样本测序，适用于微生物16S/18S/ITS、宏基因组测序等科研场景。 货号 名称 规格 价格（元） GM3006 16S/18S/ITS等扩增子测序（二代） 样 139 16S送样登记单.xlsx 分析内容： 实验结果展示： 1、物种组成柱状图 2、物种相对丰度热图 3、PCoA主成分分析 4、差异分析LEfSe条形图 实验流程： TotalDNA抽提与质检-目标区域PCR扩增-文库构建-上机测序-数据分析； 送样运输要求： 以下所有样本必须在送样管上标记清楚样本编号，-80℃冰箱冻存（-80℃冻存时间不超过 六 个月），全程干冰运输送样 。采集的标本应盛于无菌容器内，确保所采集的标本无外源性的污染。 16s原则上不返样，确需返样务必提前说明， 建议合理送样，如送样量过多会进行销毁 。 一、 粪便样本 A. 带上手套收集新鲜的粪便样品，人的粪便量为500mg，大鼠为1-2粒，小鼠为3-5粒，收集后分装至 2mL EP 管（无菌）或冻存管（无菌）中，迅速放入液氮中速冻，之后放于-80℃或液氮中长期保存，干冰送样。 B. 人的粪便样本可用无菌牙签或粪便取样器截取样品中段内部（避免表层中的肠道膜脱落细胞），外部容易污染且细菌DNA 由于接触空气可能有降解。 二、动物肠道内容物样本 1 普通动物肠道内容物 A. 在实验对象死亡后，无菌条件下，取出整个肠道，用无菌解剖刀切取所需肠段。用无菌手术刀挖取内容物，并立即放在冰上进行分装及标记将已取的样品分装至2mL EP 管（无菌）或冻存管（无菌）中，每管组织量为0.5~1g，每个样品分装2~3 管备份，迅速放入液氮中速冻，之后放于-80℃或液氮中长期保存，干冰送样。 B. 注意事项：一些肠道内容物较难取样的可以取肠道样本作为研究对象，此类型样本无法出去宿主本身的核酸，检测建库结果存在宿主基因的风险，若介意宿主基因干扰，需要分离出肠道内溶物再送样。液氮速冻，-80℃长期保存，干冰运输。注意若为微生物多样性Q-MCD 产品类型的样本，样本量每管组织量为0.5~2g，太少无法准确称量样本重量。 2 飞虱类昆虫肠道样本 A. 取褐飞虱成虫200+头，用冰（-20℃冷冻）使其昏迷，用70%乙醇进行表面灭菌处理，在用灭菌水漂洗数次。 B. 解剖镜下用镊子夹住飞虱的头胸部和腹末，轻轻用力将肠道以及内脏器官拉出，用灭菌水漂洗，去除卵巢、脂肪以及其他内脏器官，取出肠道放于1.5mL离心管，每管组织量为0.25~0.5g，每个样品分装2 管备份分装好后样本迅速放入液氮中速冻，之后放于-80℃或液氮中长期保存，干冰送样。 三、土壤样本 1 普通土壤样本 A. 根据研究目的选择有代表性的取样地点及采样点。 B. 除去土壤表层未分解的凋落物层，用已灭菌的刀或铲去除表层5cm 的土壤，再用烧灼过的勺、铲或土壤取样器取样10-25g，装于无菌塑料封口袋内，多 点样本均匀混合（注意保留适当空间） ，标明采样地点，深度、日期等信息。 C. 两天内常温或冰袋运送到实验室，除去动植物残体、石砾等杂质，将大块的样品捣碎，过2mm 筛后，分装至2mL 或更大体积的EP 管或冻存管中；每管 土壤含量大概0.25~0.5g，需保证送样量在1~2g，若土壤含微生物较少，需增加送样量。 D. 未分装样本4 ℃保存时间不要超过一个月，分装后样本-80℃或液氮中长期保存，干冰送样。 2 根际土壤样本 A. 收集植物植株，去除根部大块土壤；摇动植株去除附着不紧密的土壤，使用无菌刷子收集根部附着紧密的土壤；随机多点取样5-10g，装于无菌塑料封口袋 内，多点样本均匀混合（注意保留适当空间） ，标明采样地点，深度、日期等信息。 B. 两天内常温或冰袋运送到实验室，除去动植物残体、石砾等杂质，将大块的样品捣碎，过2mm 筛后，分装至2mL 或更大体积的EP 管或冻存管中；每管土 壤含量大概0.25~0.5g，需保证送样量在1~2g，若土壤含微生物较少，需增加送样未分装样本4 ℃保存时间不要超过一个月，分装后样本-80℃或液氮中长期保存，干冰送样。 3 淤泥样本 A. 根据研究目的选择有代表性的取样地点及采样点。 B. 采集污泥样品，放于无菌离心管或其它无菌容器中。 C. 4 小时内常温带回实验室中分装至2mL EP 管或冻存管中；或用PBS 进行清洗，使用PBS 的体积需是淤泥样本的3-10 倍，摇床混匀孵育1-2h 或者使用超声波清洗仪清洗15-30min，瞬离（转速达到800g 即可停止），将上清液转至新的合适体积的离心管中，8000g 4℃离心10min 收集沉淀或下层，分装于2 mL 离心管中；每个样品至少2g。 D. 分装后样本迅速液氮速冻，之后放于-80°C 或液氮中长期保存，干冰送样。 4 水体样本 A. 根据研究目的选择有代表性的取样地点及采样点。 B. 采用多点取样法取样，采样时不可搅动水底的沉积物；避免手指和其他物品对瓶口的沾污。 C. 取样后4 小时内（期间4 ℃避光保存）真空抽滤、富集菌体（平行重复样本可用同一滤膜过滤）。 D. 带有富集菌体的干燥滤膜剪碎或折叠后（直接保存，剪碎或者折叠有可能吸附菌体的一面会粘在一起，不利于提取时裂解洗脱菌体）保存在2mL 或5mL 无菌EP 管中， -20℃或-80℃保存，干冰送样。 E. 如果没有滤水设施，可将水体收集后，使用50ml 无菌离心管8000g 4℃离心10min 收集下层， -20℃或-80℃保存，干冰送样。 F. 注意事项： a. 过滤大量低微生物含量的清亮水样用0.22μm 的聚苯醚砜滤膜（Polyethersulfone），每个样本至少1L 水样。 b. 浑浊水样使用0.22μm 滤膜过滤缓慢容易堵塞时，建议使用0.45μm 的混合纤维素酯滤膜（膜醋酸纤维素、硝酸纤维素）；如水体中含有杀虫剂和除草剂，则避免使用这类滤膜；每个样本0.5L-1L 水样，如有堵塞则将同一样本滤膜保存于一管。 c. 如果水样中不可溶解的颗粒较多，需要使用2-5μm 孔径的滤膜将不可溶解的颗粒杂质滤去，再使用0.22μm 或0.45μm 的滤膜富集菌体；每个样本0.5L-1L 水样，如有堵塞需则同一样本滤膜保存于一管。 d. 如果研究的是病毒，则需先用0.22μm 滤膜把水中的细菌和其它大个头细胞过滤掉，再用带正电荷滤膜（ Virozorb 的1MDS 或NanoCeram 的Virus Sampler cartridges）富集病毒；每个样本20L 水样。 e. 微生物含量低的清亮水体可使用多管50ml 分装离心，合并下层进行二次离心富集，富集后体积不能太大（200ul-500ul），需要一次性提取全部富集体积样本。 四、物体表面微生物样本 A. 根据研究目的选择有代表性的取样地点及采样点。 B. 采集样品，放于无菌离心管或其它无菌容器中。 C. 4 小时内常温带回实验室中，取10g 样品（评估物体表面微生物含量确定样本量，...