服务介绍： miRNA引物设计是针对成熟序列设计的茎环引物，长度大约45bp，可以自身成环。在3’-端序列的反向互补序列引入一段固定的序列形成一个茎环，即为逆转录引物；在序列的5’-端引入一段固定的序列，即为扩增引物的上游序列。 货号 名称 规格 价格（元） GM2002 miRNA引物合成 1 OD 200 实验结果展示： 1、引物设计 2、引物示例 实验流程： 设计引物-合成引物 使用方法： miRNA- 茎环法- 逆转录引物（*****-RT）稀释方法： 1.引物附在离心管内壁上，稀释前请将引物离心数秒使干粉聚集至管底，小心开启管盖，以免引起粉末飞扬造成损失； 2.将所有逆转录引物（-RT，以及U6-A）稀释成100μM：按照管壁上的nmol数加入10倍体积的无酶水（Water Nuclease-Free，Servicebio，货号:G4700）； 3.以上稀释引物各取1μL（-RT，以及U6-A）加入到一个新的无菌无酶离心管，用无酶水补齐到100ul，混合均匀，即为Gene Specific Primer (1 μM)； 逆转录操作步骤 （参考） 以SweScript RT II First Strand cDNA Synthesis Kit (With gDNA Remover)（Servicebio, G3333）为例： 1. 基因组去除：配制基因组去除反应体系(推荐10 μL)： 10×gDNA Remover Buffer 1 μL gDNA Remover 1 μL Total RNA/mRNA 0.1 ng-5 μg/10 pg-0.5 μg Nuclease-Free Water Add to 10 μL 2. 第一链cDNA合成 (1) 逆转录反应体系配制（推荐20 μL反应体系）： 基因组去除反应液 10 μL 5×Reaction Buffer 4 μL Gene Specific Primer (1 μM) 2 μL SweScript RT II Enzyme Mix 1 μL Nuclease Free Water Add to 20 μL 轻轻混匀并离心； (2) 逆转录程序设置： 25℃ 5 min 55℃ 5-15 min 85℃ 5 s 为您推荐赛维尔生物的另外3种可用于茎环法逆转录的试剂盒： G3330 、 G3331 、 G3332 。 定量PCR可以使用2×Universal Blue SYBR Green qPCR Master Mix（Servicebio，货号: G3326 ），具体使用方法与上文一致。 送样运输要求： 基因名称和种属、或基因ID号、或成熟的RNA序列；成熟的miRNA有3p和5p之分，故需要告知设计3p还是5p，可以参考相关文献。 仅供科研用途，不可用于临床诊断！