产品信息

产品简介

本试剂盒通过特别优化的裂解缓冲体系，结合超顺磁性磁珠特异性结合RNA的特点，并且无需多步离心，可从20-200 mg多种富含多糖多酚的复杂植物组织样本（如叶片、种子、果实等）中安全、快速、高效地提取高纯度、高完整度的RNA。利用本试剂盒提供的缓冲体系能够极大的去除复杂植物样本中的多糖、多酚、蛋白、细胞碎片等杂质，无需苯酚、氯仿等有机试剂。得到的高纯度RNA可直接用于Northern杂交、斑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-YCR、RT-qYCR、cDNA文库构建等各种分子生物学实验。

储存与运输

DNase，DTT Solution冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成

使用前须知（请仔细阅读）

1. Buffer PRL1如有沉淀现象，请于37℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

2. 操作前请向Buffer PRL3加入DTT Solution，至终浓度为4%，即1 mL Buffer PRL3加入40 µL DTT Solution。此裂解液最好现配现用，加入DTT Solution的Buffer PRL3可在4℃放置一个月。按用量配制，避免浪费试剂。

3. 使用前请向Buffer RWA加入24 mL的无水乙醇，Buffer RWB中加入96 mL的无水乙醇。

4. 使用研磨仪研磨时，将研磨仪提前预冷。

5. 自备磁力架。

6. 植物组织样本的起始量和样本剪切大小对RNA的提取效果有很大影响。若起始量过多，RNA的提取质量与相对收量都会有所降低，若样本太大，导致研磨不充分，也会影响RNA质量与得率。在实验开始之前，请参考下表中植物组织样本不同起始量和样本剪切大小。

表1不同样本的起始取量和样本剪切大小

操作步骤

1. 植物组织样本裂解：

a. 提前向2.0 mL Nuclease-free研磨管（推荐YT-200-M）中加入500 μL的Buffer PRL1，再加入3-4颗4 mm的钢珠（推荐Y0115-200G）。称取表1中推荐量的新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小）迅速转移到研磨管中，将研磨管置于研磨仪（推荐YWE-3D）上进行研磨（推荐研磨程序：频率70 HZ，温度4℃，每次30 s，研磨20-30次，间隔5 s），直至研磨成匀浆状（如果组织没有被彻底匀浆，会影响RNA得率和质量，可延长研磨次数，直到组织充分研磨）。待充分研磨后，56℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。

b. 提前向2.0 mL Nuclease-free研磨管（推荐YT-200-M）中加入3-4颗4 mm的钢珠（推荐Y0115-200G），并用液氮预冷。称取表1中推荐量的新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小）迅速转移到研磨管中，将研磨管置于研磨仪（推荐YWE-3D）中进行研磨（放置研磨管前将适配器于液氮中迅速预冷，推荐研磨程序：频率70 HZ，温度4℃，每次30 s，研磨4次，间隔5 s），直至研磨成粉末状（如果组织没有被完全研磨成粉末状，会影响RNA得率和质量，可延长研磨次数，直到组织充分研磨）。待充分研磨后加入500 μL的Buffer PRL1，颠倒混匀，56℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。

c. 称取新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小），迅速转移到用液氮预冷的研钵中，加入液氮，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响RNA的收率和质量），然后将研磨成粉末的样本（表1中推荐量）转移至含有500 μL的Buffer PRL1的1.5 mL Nuclease-free的离心管中，56℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。

d. 称取表1中推荐量的新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小），迅速转移到用液氮预冷的1.5 mL Nuclease-free离心管中，加入液氮，用一次性研杵棒研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响RNA的收率和质量），然后像离心管中加入500 μL的Buffer PRL1，56℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。

2. 12,000 rpm，室温离心5 min，将上清转移至一新的1.5 mL Nuclease-free离心管中，加入1/5上清体积的Buffer PRL2，充分颠倒混匀；

3. 12,000 rpm，4℃离心5 min，将上清转移至一新的2.0 mL Nuclease-free离心管中，向上清中加入500 μL的Buffer PRL3（使用前请确认已加入DTT Solution），充分颠倒混匀；

4. 向第3步中加入与混合液等体积的异丙醇，充分上下颠倒混匀。再加入40 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需分散均匀），使用移液器吹打或涡旋振荡混匀；

5. 室温静置10 min，放置过程中，使用移液器吹打或涡旋振荡混匀数次，保持磁珠处于悬浮状态；

6. 将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；

7. 加入600 μL Buffer RWA，移开磁力架，使用移液器吹打或涡旋振荡至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；

8. 加入700 μL Buffer RWB，移开磁力架，使用移液器吹打或涡旋振荡至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清；

9. 移去磁力架，进行DNase消化：

a) DNase反应液配制：取10 μL 10×DNase Buffer，10 μL DNase，80 μL Nuclease-free Water于新的1.5 mL Nuclease-free离心管中混匀；

b) 向含有磁珠的离心管中加入100 μL DNase反应液，使用移液器轻轻吹打或涡旋振荡至磁珠分散均匀，室温放置15 min，期间每5 min使用移液器混匀一次；

c) 加入600 μL Buffer RWB，使用移液器吹打或涡旋振荡至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清。

10. 重复步骤8；

11. 将离心管盖打开，室温放置5-10 min，使乙醇完全挥发（避免磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）；

12. 移去磁力架，向离心管中加入100-150 μL Nuclease-free Water，使用移液器轻轻吹打或涡旋振荡至磁珠分散均匀，室温静置5 min；

13. 将离心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的1.5 mL Nuclease-free离心管中，即得高纯度的RNA。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 磁珠悬液在保存过程中应避免冷冻；磁珠易沉降，使用前应充分振荡使其保持均匀悬浮状态。

3. 向样本中加入磁珠前，需要将样本中的试剂充分混合均匀。

4. 洗脱RNA前应使乙醇完全挥发，避免残留的乙醇影响下游实验。

5. 请勿长时间干燥磁珠，以免影响RNA洗脱效率。

6. 实验时穿实验服，戴一次性手套，佩戴口罩，避免讲话，使用Nuclease-free的吸头和离心管避免交叉污染。

7. 对于水分含量较多的样本，可以适当增加样本起始量。

附表：

本试剂盒对多种植物样本的RNA提取量见下表，RNA的提取量和植物的种类、部位、新鲜程度以及生长状态有关，下表仅供参考。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）