产品信息

产品简介

本试剂盒采用特殊的裂解缓冲体系与硅胶膜结合的纯化方式，可以对各种富含多糖多酚的植物组织样本（如叶片、种子、果实等）进行RNA提取。本试剂盒能够有效去除植物组织样本中的多糖、多酚及蛋白质、细胞碎片等杂质，可在1小时内从20-200 mg的植物组织样本中纯化得到多至数十微克高纯度、高完整度的RNA。无需苯酚、氯仿等有机试剂。提取得到的高纯度RNA可直接用于Northern杂交、斑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-YCR、RT-qYCR、cDNA文库构建等各种分子生物学实验。

储存与运输

DNase，DTT Solution冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成

使用前须知（请仔细阅读）

1. Buffer PRL1如有沉淀现象，请于37℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

2. 操作前请向Buffer PRL3加入DTT Solution，至终浓度为4%，即1 mL Buffer PRL3加入40 µL DTT Solution。此裂解液最好现配现用，加入DTT Solution的Buffer PRL3可在4℃放置一个月。按用量配制，避免浪费试剂。

3. 使用前请向Buffer RWA加入12 mL的无水乙醇，向Buffer RWB中加入80 mL的无水乙醇。

4. 使用研磨仪研磨时，将研磨仪提前预冷。

5. 植物组织样本的起始量和样本剪切大小对RNA的提取效果有很大影响。若起始量过多，RNA的提取质量与相对收量都会有所降低，若样本太大，导致研磨不充分，也会影响RNA质量与得率。在实验开始之前，请参考表1中植物组织样本不同起始量和样本剪切大小。

表1不同样本的起始取量和样本剪切大小

操作步骤

1. 植物组织样本裂解：

a. 向2.0 mL Nuclease-free研磨管（推荐YT-200-M）中加入500 μL的Buffer PRL1，再加入3-4颗4 mm的钢珠（推荐Y0115-200G）。称取表1中推荐量的新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小）迅速转移到研磨管中，将研磨管置于研磨仪（推荐YWE-3D）上进行研磨（推荐研磨程序：频率70 HZ，温度4℃，每次30 s，研磨20-30次，间隔5 s），直至研磨成匀浆状（如果组织没有被彻底匀浆，会影响RNA得率和质量，可延长研磨次数，直到组织充分研磨）。待充分研磨后，56℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。

b. 取表1中推荐量的新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小）迅速转移到装有3-4颗4 mm的钢珠（推荐Y0115-200G）并用液氮预冷的2.0 mL Nuclease-free研磨管（推荐YT-200-M）中，将研磨管置于研磨仪（推荐YWE-3D）中进行研磨（放置研磨管前将适配器于液氮中迅速预冷，推荐研磨程序：频率60 HZ，温度4℃，每次30 s，研磨4次，间隔5 s），直至研磨成粉末状（如果组织没有被完全研磨成粉末状，会影响RNA得率和质量，可延长研磨次数，直到组织充分研磨）。待充分研磨后加入500 μL的Buffer PRL1，颠倒混匀，56℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。

c. 取新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小）迅速转移到液氮提前遇冷的研钵中，加入液氮，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响RNA的收率和质量），将研磨成粉末的样本（表1中推荐量）转移至含有500 μL的Buffer PRL1的1.5 mL Nuclease-free的离心管中，56℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。

d. 取表1中推荐量的新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小），迅速转移到用液氮预冷的1.5 mL Nuclease-free离心管中，加入液氮，用一次性研杵棒研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响RNA的收率和质量），向离心管中加入500 μL的Buffer PRL1，56℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。

2. 12,000 rpm，室温离心5 min，将上清转移至一新的1.5 mL Nuclease-free离心管中，加入1/5上清体积的Buffer PRL2，充分颠倒混匀；

3. 12,000 rpm，4℃离心5 min，将上清转移至一新的2.0 mL Nuclease-free离心管中，向上清中加入500 μL的Buffer PRL3（使用前请确认已加入DTT Solution），充分颠倒混匀；

4. 向上一步的混合液中加入1/2体积的异丙醇，充分上下颠倒混匀；

5. 将上述混合液转移至RNA Spin Column中。每次加入量不超过600 µL，如果超过600 µL可分批加入；

6. 12,000 rpm室温离心1 min，弃掉滤液。将RNA Spin Column重新放回Collection Tube中；

7. 向RNA Spin Column中加入500 μL Buffer RWA，12,000 rpm室温离心1 min，弃掉滤液；

8. 向RNA Spin Column中加入600 μL Buffer RWB（请沿管壁加入Buffer RWB，有助于冲洗管壁上残留的盐分），12,000 rpm室温离心1 min，弃掉滤液；

9. DNase消化：

a) DNase反应液的配制：取5 µL 10×DNase Buffer，5 µL DNase，40 µL Nuclease-free Water于一新的1.5 mL Nuclease-free离心管中混匀；

b) 向RNA Spin Column中央加入50 μL DNase反应液，室温静置15 min；

c) 向RNA Spin Column吸附柱中加入500 μL Buffer RWB，12,000 rpm室温离心30 s，弃掉滤液，将吸附柱放回收集管中；

10. 重复操作步骤8；

11. 将RNA Spin Column放入Collection Tube中，12,000 rpm，室温离心2 min，除去残留的液体；

12. 将RNA Spin Column置于一新的1.5 mL Nuclease-free离心管中，室温放置3-5 min，使RNA Spin Column残留的乙醇完全挥发；

13. 向RNA Spin Column的膜中央加入50-100 μL Nuclease-free Water，室温静置5 min，12,000 rpm，室温离心2 min洗脱RNA。若要得到更高浓度的RNA，也可以将第一次的洗脱液重新加回至RNA Spin Column中，室温静置5 min，12,000 rpm，室温离心2 min，再次收集RNA。

注意事项

1. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。

2. 应使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

3. 应使用RNA操作专用实验台与电泳设备，并且在操作过程中佩戴口罩，防止所用器皿与试剂受到RNase的污染。

4. 如果在实验室以外的地方采集植物样本，需将样本置于液氮中，避免影响RNA的得率与质量。

5. 对于水分含量较多的样本，可以适当增加样本起始量。

附表：

本试剂盒对多种植物样本的RNA提取量见下表，RNA的提取量和植物的种类、部位、新鲜程度以及生长状态有关，下表仅供参考。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）