产品信息

产品简介

本试剂盒适用于鱼类组织总RNA的提取。试剂盒采用了特别的裂解缓冲系统，无需苯酚、氯仿等有机试剂抽提，根据吸附柱对核酸的可逆性吸附的特点，可从5-20 mg的鱼类组织中快速提取高纯度总RNA，整个提取过程可在1 h内完成。获得的RNA纯度与完整性非常高，可以直接用于Northern杂交、斑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-YCR、RT-qYCR和构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

储存与运输

Proteinase K，DNase，DTT Solution冰袋（wet ice）运输，-20℃储存；其他试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成

使用前须知（请仔细阅读）

1. Buffer RL1如有沉淀现象，请于37℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

2. 操作前请向Buffer RL1加入DTT Solution，至终浓度为4%，即1 mL Buffer RL1加入40 µL DTT Solution。此裂解液最好现配现用，加入DTT Solution的Buffer RL1可在4℃放置一个月。

3. 使用前请向Buffer RW1和Buffer RW2中加入指定量（见瓶身）的无水乙醇。

4. 按照提取样本量提前配制60%异丙醇（现配现用）。

5. 使用研磨仪研磨组织时，将研磨仪提前预冷。

操作步骤

1. 取新鲜、超低温冻存或用组织RNA稳定保存液（推荐Y3030）保存的鱼类组织5-20 mg，置于装有2-3颗3 mm研磨珠（推荐Y0214-150G）的1.5 mL RNase-free离心管中，立即加入500 μL Buffer RL1（使用前请确认已加入DTT Solution），使用组织研磨仪（推荐YWE-3D）在低温条件下将组织彻底研磨至匀浆状（如果组织没有被彻底匀浆，将会影响RNA的得率和质量）；

2. 向匀浆液中加入10 µL Proteinase K并吹打混匀，56℃孵育10-15 min；

3. 12,000 rpm 4℃ 离心5 min，将上清液转移至新的1.5 mL RNase-free离心管中；

4. 向上清液中加入等体积的60%异丙醇（此时可能会出现沉淀），用移液器吹打混匀；

5. 立即将混合液（含沉淀）全部转移至RNA Spin Column中，每次加入量不超过600 µL，若超过600 µL可分批加入；

6. 室温12,000 rpm离心30 s，弃掉废液，将RNA Spin Column重新放回Collection Tube中；

7. 向RNA Spin Column中加入500 μL Buffer RW1，室温12,000 rpm离心30 s，弃掉废液，将RNA Spin Column重新放回Collection Tube中；

8. 向RNA Spin Column中加入600 μL Buffer RW2（请沿RNA Spin Column管壁加入Buffer RW2，有助于冲洗管壁上残留的盐分），室温12,000 rpm离心30 s，弃掉废液，将RNA Spin Column重新放回Collection Tube中；

9. 配制DNase反应液，取8 µL 10×DNase Buffer、8 µL DNase和64 µL Nuclease-free Water于一新的1.5 mL RNase-free离心管中混匀；

10. 向RNA Spin Column膜中央悬空滴加80 μL DNase反应液，室温静置15 min；

11. 向RNA Spin Column吸附柱中加入500 μL Buffer RW2，室温12,000 rpm离心30 s，弃掉废液，将RNA Spin Column重新放回Collection Tube中；

12. 重复操作步骤8；

13. 室温12,000 rpm离心2 min，除去残留的液体，将RNA Spin Column置于一新的1.5 mL RNase-free离心管中，室温放置3-5 min，使RNA Spin Column残留的乙醇完全挥发；

14. 向RNA Spin Column的膜中央滴加50-100 μL Nuclease-free Water，室温静置5 min，室温12,000 rpm离心2 min洗脱RNA。若要得到更高浓度的RNA，也可以将第一次的洗脱液重新加回至RNA Spin Column中，室温静置5 min，室温12,000 rpm离心2 min，再次收集RNA。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 若基因组降解不完全，应酌量减少样本取样量。

3. 实验时应穿实验服，戴一次性手套，佩戴口罩，避免讲话，使用RNase-free的枪头和离心管，避免交叉污染。

4. 应使用RNA提取专用操作实验台与电泳设备。

附表：

本试剂盒对鱼类不同组织的总RNA提取量见下表，总RNA提取量与样本种类、取材新鲜程度及生长状态有关，下表仅供参考。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）