产品信息

产品简介
 

本产品利用超顺磁性磁珠与特别优化的裂解缓冲体系可以从各种动物组织与细胞中高效分离出高纯度与高完整度RNA。提取后的RNA产物可进行下游与RNA相关任何分子生物学实验。

应用：

1. RT-qYCR

2. RT-YCR

3. 构建cDNA文库

4. Northern杂交

5. mRNA纯化

6. 体外翻译

特点：

1. 分离出的RNA纯度与完整度较高

2. 无需多步离心

3. 无需有机溶剂

4. 小RNA占比较多

5. 33-35 min可完成单管RNA提取

样本种类与样本量：

1. 5-20 mg的动物组织

2. 105-107新鲜培养的细胞

产量：

储存与运输
 

Proteinase K，DNase，DTT Solution冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

组成
 

使用前准备
 

1. Buffer RL如有沉淀现象，请于37℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

2. 操作前请向Buffer RL加入DTT Solution，至终浓度为4%，即1 mL Buffer RL加入40 µL DTT Solution。此裂解液最好现配现用，加入DTT Solution的Buffer RL可在4℃放置一个月。

3. 使用前请向Buffer RW1和Buffer RW2中加入指定量（见瓶身）的无水乙醇。

4. 使用研磨仪研磨组织时，将研磨仪提前预冷。

5. 自备磁力架和1.5 mL Nuclease-free离心管。

操作流程图
 

表1. 不同样本的起始量和裂解Buffer RL的推荐使用量

操作步骤
 

1. 样本裂解：

a. 动物组织：取新鲜、超低温冻存或组织RNA稳定保存液（推荐Y3030）保存的动物组织5-20 mg，置于提前装有2-3颗3 mm研磨珠（推荐Y0214-150G）的1.5 mL Nuclease-free离心管或专用研磨管中，立即加入600 μL Buffer RL（使用前请确认已加入DTT Solution），使用组织研磨仪（推荐YWE-FP）在低温条件下将组织彻底研磨至匀浆状（如果组织没有被彻底匀浆，将会影响RNA的得率和质量），再加入10 µL Proteinase K，混匀后室温孵育5 min，12,000 rpm，4℃离心3 min，将上清转移至新的1.5 mL Nuclease-free离心管中（注意尽量不要吸取沉淀）。

b. 动物组织：取新鲜、超低温冻存或组织RNA稳定保存液（推荐Y3030）保存的动物组织5-20 mg，置于提前装有600 μL Buffer RL（使用前请确认已加入DTT Solution）的1.5 mL Nuclease-free离心管或专用研磨管中，把离心管置于冰浴中使用电动研磨器将组织彻底研磨至匀浆状（如果组织没有被彻底匀浆，将会影响RNA的得率和质量），再加入10 µL Proteinase K，混匀后室温孵育5 min，12,000 rpm，4℃离心3 min，将上清转移至新的1.5 mL Nuclease-free离心管中（注意尽量不要吸取沉淀）。

c. 动物组织：取新鲜、超低温冻存或组织RNA稳定保存液（推荐Y3030）保存的动物组织5-20 mg，迅速转移至用液氮提前预冷的研钵中，用研杵研磨组织，期间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响RNA的得率和质量），然后将研磨成粉末的样本转移至装有600 μL Buffer RL（使用前请确认已加入DTT Solution）的1.5 mL Nuclease-free离心管中，反复吹打混匀，再加入10 µL Proteinase K，混匀后室温孵育5 min，12,000 rpm，4℃离心3 min，将上清转移至新的1.5 mL Nuclease-free离心管中（注意尽量不要吸取沉淀）。

d. 悬浮培养细胞：将悬浮培养的细胞连同培养液一起转移至1.5 mL Nuclease-free离心管中，1,000 rpm离心5 min，轻轻吸弃上清，向细胞沉淀中加入表1中推荐的Buffer RL量（使用前请确认已加入DTT Solution），用移液器反复吹打均匀至无明显沉淀，再加入10 µL Proteinase K，混匀后室温孵育5 min。

e. 贴壁培养细胞：倒出培养液，用1×PBS（pH 7.4）清洗一次。向培养细胞中加入表1中推荐的Buffer RL量（使用前请确认已加入DTT Solution），然后使用移液器轻轻吹打，使细胞完全脱落，转移含有细胞的裂解液至1.5 mL Nuclease -free离心管中，再加入10 µL Proteinase K，混匀后室温孵育5 min。

2. 向离心管中加入2/3体积异丙醇（此时可能会出现沉淀），上下颠倒混匀，再加入20 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需充分振荡至分散均匀），使用移液器吹打或涡旋振荡混匀；

3. 室温静置2 min，放置过程中，使用移液器吹打混匀数次，保持磁珠处于悬浮状态；

4. 将离心管移至磁力架上静置30 s，待完全吸磁后，吸弃上清；

5. 加入600 μL Buffer RW1，移开磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待完全吸磁后，吸弃上清；

6. 加入600 μL Buffer RW2，移开磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待完全吸磁后，吸弃上清；

7. 移去磁力架，进行DNase消化：

a）DNase工作液配制：取10 μL 10×DNase Buffer，10 μL DNase，80 μL Nuclease-free Water于新的1.5 mL Nuclease-free离心管中混匀；

b）向含有磁珠的离心管中加入100 μL DNase工作液，使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，室温放置10 min，期间每5 min使用移液器混匀一次；

c）向含有磁珠的离心管中加入600 μL Buffer RW2，使用移液器吹打或涡旋振荡至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待完全吸磁后，吸弃上清；

8. 重复步骤6；

9. 将离心管盖打开，室温放置5 min，使乙醇完全挥发（避免磁珠过度干燥影响RNA得率）；

10. 移去磁力架，向离心管中加入50-100 μL Nuclease-free Water，使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，室温静置5 min；

11. 将离心管置于磁力架上，待完全吸磁后，取上清至一新的1.5 mL Nuclease-free离心管中，即得高纯度的RNA。

注意事项
 

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 磁珠悬液在保存过程中应避免冷冻；磁珠易沉降，使用前应充分振荡使其保持均匀悬浮状态。

3. 向样本中加入磁珠前，需要将样本中的试剂混合均匀。

4. 洗脱RNA前应使乙醇完全挥发，避免残留的乙醇影响下游实验。

5. 请勿长时间干燥磁珠，以免影响RNA洗脱效率。

6. 实验时穿实验服，戴一次性手套，佩戴口罩，避免讲话，使用Nuclease-free的吸头和离心管避免交叉污染。

实验案例：
 

1. 使用Y3618 磁珠法动物组织/细胞RNA提取试剂盒提取小鼠心脏（20 mg）、肝脏（20 mg）、肾脏（15 mg），大鼠脑（20 mg）、肌肉组织（20 mg），家兔脾脏（15 mg）、肺组织（20 mg）总RNA结果显示（图1、表1）：Y3618提取的RNA纯度与完整度较好。

 图1：提取RNA后进行琼脂糖凝胶电泳。

表1：用80 µL的Nuclease-free Water洗脱RNA后进行浓度测定。

2. 使用Y3618磁珠法动物组织/细胞RNA提取试剂盒，从小小鼠心脏（20 mg）、肝脏（20 mg）、肾脏（15 mg），大鼠脑（20 mg）、肌肉组织（20 mg），家兔脾脏（15 mg）、肺组织（20 mg）中提取总RNA。毛细管电泳结果显示（图2），通过Y3618提取的RNA 28S：18S比值在2.0至2.7之间，表明RNA完整性良好。

图2：用Agilent 4150检测提取后的RNA完整度。

（产品包装升级中，以实物为准。）

仅供科研用途，不可用于临床诊断！