产品信息

产品简介

本产品RNA提取液是一种用于细胞或组织总RNA提取的试剂，利用异硫氰酸胍等物质迅速裂解细胞，使RNA释放并萃取至苯酚中，同时内含RNase抑制剂，防止RNA降解，保持RNA的完整性。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；2-8℃避光保存，有效期12个月。

组成

使用前须知（请仔细阅读）

自备氯仿替代物（Y3025）或氯仿、异丙醇、DEPC水或无RNase水（Y4711）、75%乙醇（用DEPC水或无RNase水配制）。

操作步骤

1. 细胞或组织样本裂解

a) 贴壁细胞：去除细胞培养液，用适量预冷PBS清洗细胞，尽量将PBS吸除干净。按照6孔板每孔加1 mL RNA提取液，12孔板每孔加0.5 mL RNA提取液的用量向孔板中加入RNA提取液，轻轻晃动使板底细胞充分接触RNA提取液，移液枪吹打细胞，使细胞裂解，然后转移至离心管中，室温静置5 min；

b) 悬浮细胞：离心收集细胞，尽量将上清液吸除干净，每1-10×10⁶个细胞加入1 mL RNA提取液，移液枪吹打数次使细胞裂解，室温静置5 min；

c) 组织样本：组织剪切成小块（黄豆大小），放入预冷的匀浆器内。每1 mL RNA提取液可处理约5~100 mg组织（建议根据组织RNA含量调整用量），匀浆至无可见组织块。（可选步骤：4℃，12,000 g离心10 min使组织碎片分离，转移上清至新的离心管中。）

d) 血液样本：新鲜血液样本每200 μL加入800 μL RNA提取液，移液枪反复吹打混匀，室温静置5-10 min；如果是组织RNA稳定保存液（Y3030）保存的血液样本，先经4,000-5,000 rpm离心5 min，弃上层组织RNA稳定保存液，再加入800 μL RNA提取液，移液枪反复吹打混匀，室温静置5-10 min。

2. RNA抽提：每1 mL RNA提取液加100 μL氯仿替代物（Y3025）或200 μL氯仿，涡旋混匀（推荐涡旋混匀仪YMV-4500B）或离心管上下颠倒剧烈晃动15 s，室温静置3-5 min。

3. 离心：4℃，12,000 g离心15 min，小心转移上层无色水相至新的离心管中，每毫升提取液大约可吸取500-550 μL。

4. 沉淀RNA：向上述收集的水相提取物管中加入500 μL异丙醇，轻轻颠倒混匀数次，室温或4℃沉淀10 min（或-20℃沉淀15 min）。

5. 离心：4℃，12,000 g离心10 min，在管底可见白色沉淀即为总RNA，弃上清。

6. 洗涤：加入1 mL 75%乙醇，颠倒混匀（至白色沉淀漂浮为佳）。4℃，12,000 g离心5 min，弃上清，再高速短暂离心（5,000 g离心3-5 s），用微量吸头小心吸尽液体。

7. RNA溶解：将有RNA沉淀的离心管开口静置3-5 min，使RNA稍微晾干，然后加入20-50 μL DEPC水或无RNase水（或者使用RNA溶解液Y3040、Y3041）使RNA充分溶解，即可用于浓度检测及后续实验，不能及时进行后续实验时需将RNA置于-70℃保存。注意不可让RNA过分干燥，否则很难溶解，且会影响A260/280比值。

注意事项

1. 所有枪头和离心管均需无RNA酶污染，可购买本公司无菌无酶耗材。

2. 本试剂含异硫氰酸胍和重蒸酚，避免接触皮肤或吸入。

3. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）