产品信息

产品简介

核糖核酸酶（RNase）是一种RNA水解酶，普遍存在于环境中，在一些生物材料、酶、试剂中都有较高浓度的残留，这对RNA相关实验操作带来非常不利的影响，因此检测任何与RNA接触的溶液或生物材料中RNase的残留是非常必要的。

本试剂盒采用一种独特的RNA修饰底物（RNase Substrate），可快速、灵敏的检测RNase的活性，RNA修饰底物一端带有荧光基团，另一端带有淬灭基团，当无RNase存在时，淬灭基团接近荧光基团，将荧光基团的荧光抑制至极低水平；当有RNase存在时，RNA修饰底物被水解，荧光基团与淬灭基团在空间上被分离，荧光基团产生大量的荧光信号。由于RNA底物的荧光会随着RNase活性的增加而增加，因此可对使用荧光计监测得到的结果进行动力学评估。

本试剂盒提供了RNase A作为检测体系的阳性对照，可检测低至0.5 pg的RNase A。除了能够检出RNase A的活性外，本试剂盒还可以检测RNase T1、Micrococcal Nuclease、S1 Nuclease、Mung Bean Nuclease和Benzonase等酶的活性，并且还可以与DNase检测系统兼容，由于RNA底物与DNA底物带有两种不同的荧光标记，所以可以将两种底物加入同一反应体系中，使用荧光计对单个样品中的RNase和DNase进行实时分析。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；有效期12个月。

组成

使用前准备

1. 96孔黑色酶标板（Nuclease-free）。

2. Nuclease-free移液器、吸头。

操作步骤

1. 配制反应体系前准备：

a) 稀释一系列RNase A浓度梯度制作标准曲线：用Nuclease-free Water将RNase A（10 mg/mL）稀释为：0.25 pg/µL、0.5 pg/µL、1 pg/µL、2 pg/µL，不加RNase A作为阴性对照，分别取10 µL加入到96孔酶标板中，最终RNase A的量为0、2.5 pg、5 pg、10 pg、20 pg；

b) 样品制备：如果待检样品为液体，可直接使用；如果待检样品为固体，取样后，需浸泡于Nuclease-free Water中制备成液体样品备用；

2. 参照下表配制反应体系：

配制反应体系时，请按照下表将试剂盒对应组分加入到96孔板。

a. RNase Substrate可放在最后加入反应体系中，避免被提前降解；若检测的核酸酶为Zn²⁺依赖，如Mung Bean Nuclease、S1 Nuclease等，向反应体系中另加入1 μL 100 mM ZnSO₄。

3. 检测：将反应体系振荡或轻轻吹打混匀，确保充分混匀后立即使用酶标仪检测，设置酶标仪检测温度为37℃（如果酶标仪没有温度设置，可进行室温检测，此时酶活可能偏低），激发/发射波长为492/518，连续检测30 min，时间间隔为2 min（检测时间可根据RNase含量进行调整，含量较低时可延长酶标仪检测时间至60 min，时间间隔为5 min）。

4. 根据RNase A的标准曲线计算出样品中残留的RNase A量。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 由于核糖核酸酶在环境中广泛存在，请务必在超净台或生物安全柜中操作，避免待检样品受到环境中的核糖核酸酶污染。

3. 反应体系的配制需要在冰上操作，避免RNase Substrate被提前降解。

4. 为确保检出的准确性，请至少配制两个复孔。

5. 如果不是检测样品中RNase A的残留情况，可不用制作RNase A的标准曲线。

6. 反应液配制过程应全程在冰上进行。

7. RNase Substrate需避光，配制反应液时应避免强光照射。

8. 反应液的配制、分装请使用Nuclease-free无酶吸头、尽量避免样品间交叉污染。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）